2.1.4. Сопоставление клинических факторов у больных злокачественными, пограничными и доброкачественными новообразованиями яичников.

Больные основных сравниваемых групп не различались достоверно по возрасту и большинству других анамнестических данных.

Следует отметить более высокую частоту заболеваний желудочно-

кишечного тракта в группе больных РЯ по сравнению с группами больных ПОЯ и ДНЯ (р=0,07).

Характеристика лабораторных методов исследования больных новообразованиями яичников.

Специальные биохимические исследования опухолевых маркеров (VEGF,

VEGFR-1, VEGFR-2) проводили в сыворотке крови и образцах тканей опухоли до лечения.

Получение сыворотки крови. Для получения сыворотки венозную кровь, взятую в чистую сухую пробирку, оставляли на 30 мин при комнатной температуре для формирования сгустка, затем центрифугировали в течение 30 мин на холоду при 4^оС при 3500 об/мин при комнатной температуре. Надосадочную фракцию (сыворотку) разливали на аликвоты по 0,5 мл и хранили при -70^оС до проведения иммуноферментного анализа.

Для проведения иммуноферментного анализа в опухолях и неизмененных тканях яичников получали их экстракты как описано ранее (Е.С.Герштейн и соавт., 2007). Образцы тканей лизировали в соотношении 1:3 в буфере следующего состава: 20 мМ Трис-НСl (рН 7,5), 150 мМ NaCl, 1 мМ ЭДТА, 1 мМ ЭГТА, 1% Тритон X-100, 2,5 мМ пирофосфат натрия, 1 мМ β- глицерофосфат, 1 мМ ортованадат натрия, 1 мкг/мл леупептина. Полученные лизаты центрифугировали в течение 30 мин при 20000 об/мин, 4°С (центрифуга OptimaTM TLX, Beckman, США).

Концентрацию VEGF, VEGF-R1, VEGF-R2 в сыворотке крови и их содержание в образцах тканей опухолей яичников определяли иммуноферментным методом с использованием реактивов фирмы «R&D» (США).

Измерения проводили на автоматическом универсальном ридере для микропланшет EL_X800 (Bio-Tek Instruments, Inc., США). Концентрацию исследованных показателей в плазме крови выражали: VEGF - в пг/мл; VEGF- R1 и VEGF-R2 – в нг/мл. В тканях: VEGF – в пикограммах на 1 мг (пг/мг) общего белка; VEGF-R1 – в нанограммах на 1 мг (нг/мг) общего белка; VEGF- R2 – в пг/мг общего белка. Общий белок определяли по методу Лоури.

При подозрении на гранулезоклеточную опухоль яичников у больных иммуноферментным методом определяли концентрацию ингибина В реактивами фирмы («Diagnostic Systems Laboratories, Inc.» «DSL», США ).