Флуоресцентная спектрометрия

Для решения задач дозиметрии накопления фотосенсибилизатора

фотодитазин в тканях вульвы был использован метод локальной флуоресцентной спектроскопии с помощью спектрально-флуоресцентной диагностической устанокви «Спектр-Кластер» (ООО «Кластер», ИОФ РАН, Москва) (рисунок 2.5).

Рис. 2.5. Спектрально-флуоресцентная диагностическая установка

«Спектр-Кластер»

Установка состоит из следующих блоков:

• Гибкий волоконно-оптический катетер для транспортировки лазерного излучения к патологическим тканям и переноса наблюдаемого флюоресцентного излучения тканей.

• Спектрометр.

• Персональный компьютер с установочным программым обеспечением.

• Кабель для связи с персональным компьютером.

• Лазерная установка для возбуждения флюоресценции.

• Источник питания спектрометра.

• Приборная стойка.

Для транспортировки лазерного излучения к патологическим тканям вульвы, а также для передачи и регистрации флюоресценции ткани использовался Y- образный катетер, диаметром 3 мм. Дистальный конец катетера был укомплектован специальной насадкой. Этот катетер состоял из 6 волокон диаметром 100мкм для сбора флюоресцентного излучения и одного волокна диаметром 110мкм для возбуждения флюоресценции.

Измерения проводились при соприкосновении дистального торца оптического волокна возбуждающего флуоресценцию гелий-неонового лазера с тканями вульвы. Спектры анализировались по форме и амплитуде сигнала. Затем автоматически при построении гистограммы рассчитывалась нормированная флуоресценция тканей (F_n).

Полученные изображения имели следующий вид:

• ось абсцисс, градуированная от 421 до 917, по которой отложена длина волны возбуждающего лазерного излучения, выраженная в нанометрах (нм);

• ось ординат, градуированная целыми значениями, по которой отложена интенсивность флуоресценции в относительных единицах;

• спектры флуоресценции имеют два основных «подъема»: первый - лазерная кривая (характеризует рассеянное и отраженное лазерное излучение), второй - кривая аутофлюоресценции (характеризует флюоресценцию фотодитазина в диапазоне 660-680 нм по полуширине).

Для возбуждения флуоресценции фотодитазина применялось лазерное излучение с длиной волны 662 нм.

В исследовании использовалась методика измерений нормированных спектров флуоресценции биологических тканей in vivo при терапевтических концентрациях экзогенного флуоресцентного маркера. Информативным параметром при этом являлась нормированная флуоресценция тканей F_n, которая определялась отношением интегральной интенсивности излучения флуоресценции ФС к интегральной интенсивности обратного диффузнорассеянного сигнала возбуждающего лазерного излучения.

Измерения проводились при сканировании пятном возбуждающего лазерного излучения поверхности тканей вульвы в нескольких точках до введения ФС (аутофлюоресценция тканей) и через 60, 90, 120, 150 минут после введения ФС. Полученные значения усредняли для определения нормированной интенсивности флуоресценции F_n.

2.7.