ГЛАВА 5. ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ VEGF И VEGFR-2 В ОПУХОЛЯХ ЯИЧНИКОВ

(результаты собственных исследований)

ИГХ исследование экспрессии VEGF и VEGF-R2 проводили в первичной опухоли у 25 больных РЯ различного гистологического строения (рис. 1, 2, 3).

а) б)

в)

Рис. 1. Больная С. 57 лет. Серозная папиллярная аденокарцинома яичников (grade 2). Микропрепарат ув. 100. Окраска гематоксилином и эозином (а), иммуногистохимическая реакция с VEGF (б) и с VEGF-R2 (в).

Установлено, что сильная степень окраски цитоплазмы раковых клеток моноклональными антителами к VEGF выявлена в 5 из 25 опухолей (20%), умеренная – в 11 (44%), слабая - в 9 новообразованиях яичников (36%).

Наличие экспрессии VEGF-R2 подтверждено с разной степенью интенсивности окрашивания в РЯ. При этом, сильная окрашенность цитоплазмы клеток опухоли к моноклональным антителам VEGF-R2 обнаружена в 4 из 25 (16%), умеренная - в 13 (52%), участки со слабой окрашенностью выявлены в 8 (32%) опухолях яичников.

а) б)

в)

Рис. 2. Больная И. 45 лет. Муцинозная цистаденокарцинома яичников (grade 2). Микропрепарат ув. 100. Окраска гематоксилином и эозином (а), иммуногистохимическая реакция с VEGF (б) и с VEGF-R2 (в).

В том числе, отмечено сочетание выраженной экспрессии VEGF и VEGF- R2 в 5 из 25/20%, умеренной – в 6/24% и слабой – в 6 новообразованиях яичников (24%).

высокие значения коэффициентов корреляции между VEGF и VEGF-R2 (Spearman – 0,558 при р=0,0038; Gamma – 0,692 при р=0,00065; Kendall Tau – 0,487 при р=0,0038).

а) б)

в)

Рис. 3. Больная А. 62 года. Эндометриоидная аденокарцинома яичников (grade 2). Микропрепарат ув. 100. Окраска гематоксилином и эозином (а), иммуногистохимическая реакция с VEGF (б) и с VEGF-R2 (в).

В таблице 60 представлены данные о распределении РЯ с учетом степени выраженности экспрессии VEGF и VEGF-R2 в цитоплазме опухолевых клеток. Так, при отсутствии или слабой экспрессии VEGF в 5 из 7/71,4% наблюдений обнаружено отсутствие или слабое окрашивание VEGF-R2. При умеренном окрашивании VEGF также чаще выявляли умеренное окрашивание VEGF-R2 –

6 из 10/60% опухолей. При выраженной экспрессии VEGF чаще выявляли

умеренную экспрессию VEGF-R2 (3 из 4/75%). Все выше указанное свидетельствует о тесной связи между уровнями экспрессии VEGF и VEGF-R2 в РЯ, определенных ИГХ методами (p=0,007).

Таблица 60.

Распределение образцов опухоли больных РЯ по степени экспрессии VEGF и VEGF-R2 в опухоли

Оценили связь показателей экспрессии VEGF и VEGF-R2 в опухоли с основными клиническими и морфологическими характеристиками РЯ.

Таблица 61

Распределение образцов опухоли больных РЯ по степени экспрессии VEGF в опухоли с учетом степени ее дифференцировки

Не установлено также достоверной связи между показателями экспрессии VEGF-R2 в опухоли и степенью ее дифференцировки (р=0,25). Однако обнаружено, что при низкой степени дифференцировки РЯ частота выявления показателей высокой экспрессии VEGF-R2 в опухоли была наибольшей – 3 из 8/37,5% наблюдений (табл. 62).

Таблица 62.

Распределение образцов опухоли больных РЯ по уровням экспрессии VEGF-R2 в опухоли с учетом степени дифференцировки опухоли

Таблица 63.

Распределение больных РЯ по степени экспрессии VEGF в опухоли с учетом ее гистологического строения

Не выявлено достоверных различий в показателях экспрессии VEGF в группах с различным гистологическим строением опухоли (р=0,64) (табл. 64).

Однако, в муцинозном РЯ экспрессия VEGF в опухоли чаще (71,4%) была слабой, а при серозном раке - умеренной (61,5%).

Таблица 64.

Распределение больных РЯ по степени экспрессии VEGF-R2 в опухоли с учетом ее гистологического строения

Не обнаружено достоверных различий в показателях экспрессии VEGF-

R2 в опухолях с учетом гистологического строения РЯ (р=0,25) (табл. 64). В муцинозном и серозном РЯ чаще выявляли умеренную экспрессию VEGF-R2 (5/71,4% и 7/53,8% соответственно).

Таблица 65.

Распределение больных РЯ с учетом степени экспрессии VEGF в опухоли и стадии процесса

Таблица 66.

R2 с учетом стадии РЯ

Не установлено связи показателей экспрессии VEGF и VEGF-R2 в опухоли со стадией РЯ по FIGO (p=0,5 и р=0,7 соответственно) (табл. 65 и 66).

Не выявлено достоверных различий в показателях экспрессии VEGF в опухолях яичников с учетом возраста пациенток (р=0,18) (табл. 67). Однако частота выявления сильного окрашивания была высокой у больных РЯ до 50 лет (42,9%), снижаясь до 12,5% у женщин от 50 до 60 лет и до 0% у пациенток старше 60 лет. Более наглядно это представлено на рисунке 4.

Таблица 67. Распределение образцов опухоли больных РЯ по степени окрашивания

VEGF с учетом возраста пациенток

Рис.

Напротив, частота выявления сильной окрашенности VEGF-R2 была

наибольшей у пациенток от 60 лет и старше, однако различия были статистически недостоверными (р=0,5) (табл. 68).

Таблица 68.

Распределение образцов опухоли больных РЯ по степени окрашивания VEGF-R2 с учетом возраста пациенток

Обнаружили недостоверное увеличение частоты выявления сильного окрашивания VEGF и VEGF-R2 при двустороннем опухолевом поражении яичников (р=0,6).

Следует отметить отсутствие связи интенсивности экспрессии VEGF и VEGF-R2 у больных РЯ с наличием метастазов в большом сальнике и при диссеминации процесса.

Наличие асцита не влияло на показатели экспрессии VEGF в опухоли.

Так, у пациенток без асцита частота выраженного окрашивания VEGF

составила 3 из 11/27,3% и только у 1 из 10/10% больных РЯ с наличием асцита (р=0,26). Частота выявления выраженной экспрессии VEGF-R2 в опухоли больных РЯ без асцита составила 36,4% (4 из 11) и только 10% (1 из 10) в группе больных с асцитом (р=0,17).

В то же время, у пациенток с метастазами опухоли частота выраженной экспрессии VEGF составила 2 из 5/40% и 2 из 16/12,5% у больных РЯ без таковых (р=0,19). Частота выявления выраженной экспрессии VEGF-R2 в опухоли больных РЯ с метастазами составила 20% (1 из 5) и 25% (4 из 16) в группе больных без таковых (р=0,8).

Таким образом, не выявлено достоверной связи между степенью выраженности экспрессии VEGF и VEGF-R2 в РЯ с основными клиническими признаками заболевания. У больных РЯ в возрасте старше 60 лет интенсивность экспрессии VEGF и VEGF-R2 в опухоли имела разнонаправленный характер.

Связь показателей интенсивности экспрессии VEGF и VEGF-R2, определенных ИГХ методом, с учетом уровней VEGF и VEGF-R2 в сыворотке крови и образцах ткани первичной опухоли, определенных биохимическими методами представлена в таблицах 69 и 70. Наибольшие значения VEGF в сыворотке крови установлены в группе больных РЯ с интенсивным окрашиванием опухоли (медиана 412 пг/мл), однако все наблюдаемые различия недостоверны (р=0,4) (малое количество наблюдений, большой разброс значений VEGF в сыворотке крови). Корреляционная зависимость между этими показателями также не установлена (r_s=0,14; p=0,6).

Таблица 69.

Связь интенсивности экспрессии VEGF в опухоли с иммуноферментным его определением в сыворотке крови

В то же время отметим повышение значений VEGF, в опухоли, определенных биохимическим методом, с таковыми, определенными ИГХ методом (р=0,035). Корреляционная зависимость между показателями равнялась (r_s=0,51; p=0,05).

Таблица 70.

Связь показателей экспрессии VEGF, определенной ИГХ-методом с содержания маркера, определенным ИФА в опухоли больных РЯ

Не установлено связи между значениями VEGF-R2 в сыворотке крови больных РЯ и таковыми, определенными в ткани опухоли ИГХ методом (р=0,3) (табл. 71).

В то же время более высокое содержание VEGF-R2 в ткани опухоли,

определенное биохимическими методами выявлено при сильном окрашивании VEGF-R2, оцененным ИГХ методами. Однако, корреляционная связь показателей была слабой и недостоверной (r_s=0,14; p=0,6).

Таблица 71.

Связь интенсивности ИГХ окрашивания опухоли VEGF-R2 с уровнем маркера в сыворотке крови

Таблица 72.

Связь интенсивности экспрессии VEGF-R2, определенным ИГХ методом с таковым его показателем в ткани опухоли, определенным ИФА

Таким образом, подводя итоги анализа связи содержания VEGF и VEGF- R2 в опухоли и сыворотке крови, определенными иммуноферментным методом с уровнями экспрессии выше указанных маркеров, определенными в опухоли ИГХ методом отметим, что

§ высоким уровням VEGF в ткани опухоли соответствует сильная ИГХ экспрессия маркера в образцах ткани опухоли яичников (зависимость достоверная);

§ высоким уровням VEGF-R2 в ткани опухоли чаще соответствуют также

выраженная ИГХ экспрессия маркера в опухолевой ткани (зависимость недостоверная).

§ не установлено связи между иммуноферментным содержанием VEGF и VEGF-R2 в сыворотке крови с уровнями экспрессии этих маркеров в опухоли, анализированными ИГХ методом.