Процесс витрификации ооцитов

С целью осуществления витрификации ооцитов применяли набор Kitazato Cryotop Safety Kit Vitrification #VT401. Одновременно помещали на один Cryotop не более двух клеток. При витрификации ооцита необходимой частью программы явилось удаление клеток яйценосного бугорка.

Набор для витрификации ооцитов и эмбрионов методом Криотоп (Cryotop) № 0 Основной раствор (BS): 1 флакон 1,5 мл (Исключительно для витрификации ооцитов)

№ 1 Равновесный раствор (ES): 1 флакон 1,5 мл № 2 Раствор для витрификации (VS1, VS2): 2 флакона по 1,5 мл Плавно перемещая кончик пипетки по периметру BS, постепенно добавляли к среде 20 мкл ES, инкубировали 3 минуты. Ооциты хорошего качества, находящиеся на метафазе II деления, во время данной процедуры «сжимались». Постепенное поступление раствора производили для нерезкого изменения осмолярности и выживания ооцита после витрификации. Затем также добавляли 20 мкл раствора ES, инкубировали 3 минуты. Таким же способом добавляли 240 мл ES, инкубирая 9 минут. К концу времени инкубации соотношение размеров зоны пеллюцида и периветиллинового пространства ооцита не отличалось от нативного. Затем в минимальном объеме ES ооцит переносили в VS1, эвакуировали из пипетки оставшийся раствор ES, на дно планшета. В последующем, ооцит аспирировали и переносили на новый участок VS1. Затем ооцит переносили в раствор VS2. Следующим шагом данного метода явилось - ооцит в минимальном объеме среды переносили на кончик Cryotop. Кончиком пипетки эвакуировали излишки среды и быстро опускали конец Cryotop в верификационный контейнер с жидким азотом и под слоем жидкого азота пинцетом надевали защитный чехол на Cryotop. Размораживание криоконсервированных ооцитов проводили при комнатной температуре с использованием набора Kitazato Cryotop Safety Kit Thawing #VT402. После размораживания ооцитов производили ИКСИ и оценивали оплодотворение.

2.8