<<
>>

1 Общие положения, приготовление питательных сред в лабораторных и производственных условиях.

Гидролиз белков представляет собой процесс расщепления их молекулы с деструкцией ее первичной структуры. Он может быть полным и частичным. Продуктами полного гидролиза являются аминокислоты, частичного - аминокислоты и пептиды.

В микробиологической практике для получения бактериологических питательных сред проводят частичный гидролиз.

Одним из основных источников сырья при получении питательных сред для микроорганизмов является говяжье мясо. Обычно применяют ферментативные способы его гидролиза.

В условиях лабораторий переваривание сырья осуществляют в стеклянных бутылях различной емкости, а при промышленном производстве биопрепаратов в реакторах, оборудованных системой электроподогрева, терморегуляторами, механическими мешалками.

В лабораторных условиях питательные среды готовят следующим образом. Говяжье мясо, освобожденное от костей, жира, фасций, сухожилий пропускают через мясорубку, заливают дистиллированной водой в соотношении 1: 2, экстрагируют в холодильнике 24 часа, варят 1,5-2 часа, доливая выкипающее количество жидкости до первоначального объема, фильтруют, фасуют в пробирки, колбы, закрывают ватно-марлевыми пробками, стерилизуют при 1 атм. 30 минут в автоклаве, хранят и используют по назначению.

Мясо-пептонный бульон (МПБ) готовят из мясной воды, к 1л которой добавляют 1% пептона и 0,5% натрия хлорида. Мясная вода имеет кислую реакцию, поэтому бульон подщелачивают 10%-ным раствором едкого калия или натрия гидроокиси, кипятят 2-3 минуты и проверяют рН потенциометрически с помощью рН-метра согласно инструкции, прилагаемой к прибору.

Для приготовления мясо-пептонного печеночного бульона (МППБ) используют печеночный отвар и МПБ. Отвар готовят из печени крупного рогатого скота или свиньи. Печень промывают, нарезают мелкими кусочками, заливают водой в соотношении 1: 1, кипятят 1 час, доливая выкипающую воду до первичного объема, фильтруют, разливают в колбы, стерилизуют при 1 атм.

40 минут. Затем отвар смешивают с МПБ в соотношении 1: 1 или 1: 3, доводят до кипения, добавляют 1,25 г\л натрия хлорида, устанавливают рН 7,5 - 7,7, кипятят 15 минут, фильтруют, различают в пробирки и колбы, стерилизуют при 1 атм. 30 минут, после чего МППБ считают подготовленным к использованию.

Для приготовления мясо-пептонного агара (МПА) в МПБ добавляют 2,5 - 3% тщательно промытого, мелко нарезанного агара, колбу подогревают на огне до его расплавления, устанавливают рН не охлаждая смесь, разливают по пробиркам и автоклавируют при 1 атм. 30 минут. После автоклавирования пробирки с агаром можно хранить в течение месяца и использовать по мере необходимости.

Мясо-пептонный полужидкий агар (МППЖА) готовят по той же методике, как и МПА, с той лишь разницей, что в МПБ добавляют 0,25 -0,3% агара.

При промышленном производстве вакцин для культивирования микроорганизмов бактериальной природы служит бульон Хоттингера, приготовленный из основного перевара Хоттингера.

Для приготовления перевара используют фарш из мяса крупного рогатого скота. На 1 кг фарша добавляют 1,5 л дистиллированной воды, подогревают до 40-42оС и подщелачивают химически чистыми двууглекислой содой или 10%-ным раствором едкого натрия гидроокиси до рН 7,8 - 8,0. На 1 литр смеси добавляют 150 - 200 г очищенной от оболочек и измельченной на мясорубке поджелудочной железы крупного рогатого скота или 20 - 30 г панкреатина и 80 см3 химически чистого хлороформа. После добавления ингредиентов смесь тщательно перемешивают и оставляют для переваривания при 40-42°С в течение 4-5 суток.

Первые 6 часов смесь перемешивают через каждый час. а затем 3-4 раза в сутки. В процессе переваривания ежедневно определяют рН и в случае снижения концентрации водородных ионов перевар подщелачивают до 7,8 -8,0 добавлением 10%-ного раствора едкого натрия гидроокиси. По истечении срока переваривания фарш превращается в рыхлый сероватый осадок над которым при правильном переваривании верхний слой жидкости имеет соломенно-желтый цвет.

Падение процентного содержания триптофана, начиная с 350 -300 мг% свидетельствует о готовности перевара. К этому времени рН стабилизируется в пределах 7,8 - 8,0.

Химические показатели качественного перевара:

- общего азота — 800-1200 мг%;

- аминного азота - 600 - 900 мг%;

- триптофана - 100 - 200 мг%.

При необходимости перевар Хоттингера можно хранить до одного месяца при 18° С, для чего к нему добавляют хлороформ из расчета 10 мл на 1 литр перевара.

Бульон Хоттингера готовят из прозрачной надосадочной жидкости основного перевара, которую разводят дистиллированной или водопроводной водой до содержания в бульоне 280-300 мг% аминного азота и добавляют 0,3 - 0,5% пептона, 0,5% поваренной соли, 0,3% химически чистого двуосновного фосфорнокислого натрия и 10% воды на выкипание. Среду кипятят в течение 30 минут. В процессе кипячения устанавливают рН 7,8 - 8,0, добавляют 10%-ный раствор едкого калия или натрия гидроокиси, снова кипятят 1 час и оставляют в том же варочном котле для остывания на 1-2 часа. Затем среду фильтруют через ватно-марлевый фильтр или пластины марки "Ф". После фильтрации среду перекачивают в заранее подготовленный стерильный реактор, стерилизуют при 180-120° С в течение 45-50 минут, рН готовой среды 7,4 - 7,6.

Для характеристики гидролизатов используют показатели, которые свидетельствуют о наличии в них продуктов расщепления белка, т.е. определяют содержание общего, остаточного и аминного азота.

Содержание общего азота позволяет судить о суммарном количестве соединений азота, остаточного — о наличии низкомолекулярных фракций, аминного — о количестве низших полипептидов и аминокислот.

К важным показателям качества гидролизатов относят: количество в них белкового и аминного азота, триптофана, углеводов, скорость роста микроорганизмов на питательных средах, приготовленных из полученных гидролизатов, стабильность основных свойств выращенных культур и другие.

Наличие белкового азота в гидролизатах является количественным показателем в них крупных белковых фракций и нерасщепленного белка.

При изготовлении перевара Хоттингера определение содержания триптофана используют как тест, на основании которого судят о полноте ферментативного гидролиза.

Величина рН питательных сред, чувствительность и скорость роста бактерий в них, стабильность свойств полученных культур - это показатели непосредственно характеризующие качество питательных сред и, косвенно, гидролизатов из которых они приготовлены.

Изготовление универсальной питательной среды для всех патогенных микробов неосуществимо, так как индивидуальные потребности отдельных видов микроорганизмов весьма разнообразны. Поэтому в данных рекомендациях изложена единая схема контроля питательных сред, наиболее широко применяемых в микробиологической практике, к которым относят: МПБ, МППБ, МПА, МППЖА.

Мясные питательные среды должны отвечать требованиям представленным в таблице 1.

Таблица 1

Требования, предъявляемые к питательным средам

Наименование показателей Предъявляемые требования
Мутность, цвет, запах. Жидкая среда прозрачная, цвет - от светло -жёлтого до жёлтого; Плотная - прозрачная, слегка желтоватая; Запах сред - специфический.
рН среды В зависимости от высеваемых культур.
Содержание общего азота В пределах 250 ± 50мг%, за исключением сред для сибиреязвенных культур, которые должны содержать не более 150мг%.
Содержание остаточного азота 200 -30 мг%.
Содержание белкового азота 20 - 30 мг%.
Содержание аминного азота В зависимости от вида высеваемых бактерий
Содержание свободного триптофана Не менее 100 мг%.
Биуретовая реакция Положительная красно - фиолетовая окраска
Содержание углеводов 150- 190мг%.
Содержание тяжёлых металлов Не допускается
Содержание свободного индола Не допускается
Содержание золы Не более 1 %.
Чувствительность Десятикратные разведения культур тест -микроорганизмов при засеве на испытуемые питательные среды должны давать отчётливо видимый рост
Скорость роста Время инкубации, необходимое для роста тест - микроорганизмов (от 10 до 48 часов)
Эффективность Выход микробных тел тест - микроорганизмов с 1см3 в единицах оптической плотности (Е) в зависимости от вида от 0,12 до 0,4.
Стабильность Культуры тест - микроорганизмов должны быть типичными по морфологии, культуральным и биохимическим свойствам

<< | >>
Источник: А.Э. Высоцкий, З.Н. Барановская. СПРАВОЧНИК ПО БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИМ МЕТОДАМ ИССЛЕДОВАНИЙ В ВЕТЕРИНАРИИ. 0000

Еще по теме 1 Общие положения, приготовление питательных сред в лабораторных и производственных условиях.:

  1. Санитарно-гигиенический контроль за питанием организованных коллективов
  2. 2.6 КОНТРОЛЬНО-ОБУЧАЮЩИЕ ВОПРОСЫ И ПРАВИЛЬНЫЕ ОТВЕТЫ К НИМ ДЛЯ КОНТРОЛИРУЕМОЙ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ СТУДЕНТОВ ПО СОВРЕМЕННЫМ МЕТОДОЛОГИЧЕСКИМ АСПЕКТАМ ГИГИЕНЫ И ГИГИЕНЕ ПИТАНИЯ
  3. 6.3. Задачи и организационная структура санитарно-эпидемиологического отряда и его подразделений.
  4. 1 Общие положения, приготовление питательных сред в лабораторных и производственных условиях.
  5. Методические указания по контролю санитарно-бактериологического состояния объектов ветеринарно-санитарного надзора
  6. Содержание
- Акушерство и гинекология - Анатомия - Андрология - Биология - Болезни уха, горла и носа - Валеология - Ветеринария - Внутренние болезни - Военно-полевая медицина - Восстановительная медицина - Гастроэнтерология и гепатология - Гематология - Геронтология, гериатрия - Гигиена и санэпидконтроль - Дерматология - Диетология - Здравоохранение - Иммунология и аллергология - Интенсивная терапия, анестезиология и реанимация - Инфекционные заболевания - Информационные технологии в медицине - История медицины - Кардиология - Клинические методы диагностики - Кожные и венерические болезни - Комплементарная медицина - Лучевая диагностика, лучевая терапия - Маммология - Медицина катастроф - Медицинская паразитология - Медицинская этика - Медицинские приборы - Медицинское право - Наследственные болезни - Неврология и нейрохирургия - Нефрология - Онкология - Организация системы здравоохранения - Оториноларингология - Офтальмология - Патофизиология - Педиатрия - Приборы медицинского назначения - Психиатрия - Психология - Пульмонология - Стоматология - Судебная медицина - Токсикология - Травматология - Фармакология и фармацевтика - Физиология - Фтизиатрия - Хирургия - Эмбриология и гистология - Эпидемиология -