Материалы и методы исследования

При выполнении настоящей работы проведено обследование 113 пациентов - мужчин в возрасте от 41 до 76 лет, средний возраст которых составлял (56,7±0,7) года. Выборка больных, включенных в исследование, формировалась в результате их целенаправленного отбора и динамического обследования в отделениях клиники №1 ФГУЗ «Всероссийский центр экстренной и радиационной медицины им.

Для решения задач исследования использовали отбор больных по наиболее важному клиническому критерию – наличию симптомов функциональной диспепсии. В дальнейшем среди пациентов выделяли группы с функциональной диспепсией (n=12) (при отсутствии Helicobacter pylori-инфекции) и хроническим хеликобактерным гастритом.

Обследование пациентов включало комплекс диагностических мероприятий, которые проводили при поступлении в клинику, через 2 и 12 мес. после окончания эрадикационной терапии.

Диагноз заболевания устанавливали на основании комплексной оценки жалоб, данных анамнеза, клинико-лабораторного и эндоскопического исследований. Всем больным для уточнения локализации и характера изменений слизистой оболочки желудка (СОЖ) проводили эзофагогастродуоденоскопию (ЭГДС) с использованием аппарата «Olympus GIF-Q150» (Япония). Для выявления очагов кишечной метаплазии при ЭГДС применяли хромоэндоскопию 0,5 % метиленовым синим.

Эрадикационная терапия включала назначение омепразола по 20 мг 2 раза в сутки, кларитромицина по 500 мг 2 раза в сутки и амоксициллина по 500 мг 4 раза в сутки в течение 14 дней.

Пациентам с функциональной диспепсией и отсутствием Helicobacter pylori-инфекции вместо эрадикационной терапии проводили антисекреторную терапию омепразолом по 20 мг 2 раза в сутки в течение 14 дней.

Диагностику Helicobacter pylori-инфекции проводили с помощью ПЦР (полимеразная цепная реакция), серологического, гистологического и иммуноцитохимического (ИЦХ) методов.

Разделение пациентов на группы осуществляли через 2 мес. после окончания эрадикационной терапии. Были выделены 4 группы больных.

В первую группу (HP-отрицательные) вошли 12 пациентов с функциональной диспепсией и отсутствием НР-инфекции. Они составили контрольную группу.

Во вторую группу (эффективная эрадикация) вошли 43 пациента с эндоскопическими признаками хронического гастрита хеликобактерной этиологии, у которых произошла эрадикация НР, что подтвердилось отрицательными результатами ПЦР, ИЦХ и гистологического исследования.

В третью группу (неполная эрадикация) вошли 28 пациентов с эндоскопическими признаками хронического гастрита хеликобактерной этиологии. Через 2 мес. после окончания лечения в этой группе НР-инфекция выявлялась только ПЦР-методом, при отрицательных результатах ИЦХ и гистологического исследования.

Четвертую группу (неэффективная эрадикация) составили 30 пациентов с эндоскопическими признаками хронического гастрита хеликобактерной этиологии, у которых не произошла эрадикация, что проявлялось выявлением НР-инфекции методом ПЦР и любым другим методом, включенным в исследование.

Выделение пациентов с неполной эрадикацией НР-инфекции в отдельную группу было обусловлено следующим: с одной стороны, по результатам ИЦХ и гистологического исследования пациенты могли быть отнесены к группе пациентов с успешной эрадикацией HP. При этом подтверждение результата эрадикации в соответствие с современными стандартами было осуществлено 2 методами. С другой стороны – бактерия выявлялась методом ПЦР. Необходимо заметить, что если первые два метода позволяют обнаружить, в первую очередь, скопления и реже – единичные бактерии в ткани СОЖ, то метод ПЦР обладает большей чувствительностью и позволяет выявлять единичные бактерии как в вегетативной, так и кокковой форме. Таким образом, выделенную группу больных с неполной эрадикацией мы расценивали как пациентов с минимальным обсеменением СОЖ бактерией НР.

Выявление НР серологическим методом с помощью определения уровня IgG - антител к НР проводилось всем обследованным пациентам, однако результаты данного теста не были определяющими в диагностике хеликобактериоза, а сравнивались с прямыми методами.

Материалом для ПЦР, ИЦХ и гистологического исследования служили биоптаты из тела и антрального отдела желудка, полученные при ЭГДС.

Гистологическое исследование гастробиоптатов проводилось с использованием окраски микропрепаратов гематоксилин-эозином и дополнительных гистохимических окрасок: по Гимзе – для выявления НР, альциановым синим – для выявления кишечной метаплазии.

Для определения Ki-67 – маркёра пролиферативной активности, Bcl-2 – антиапоптотического белка, онкопротеинов р16 и c-erbB-2 в СОЖ использовали иммуногистохимический метод с применением высокочувствительного метода En Vision со специфическими мышиными моноклональными антителами к Ki-67 (RTU; «Dako Cytomation», Дания), к Bcl-2 (разведение 1:1, «Dako Cytomation», Дания), к р16 (разведение 1:50, «Dako Cytomation», Дания) и онкопротеину c-erbB-2 (разведение 1:500, «Dako Cytomation», Дания).

ИЦХ - исследование гастробиоптатов для выявления в них НР выполняли с применением поликлональных антител («Vector Lab», США) и авидин-биотиновой системы ферментного усиления (ABC Kit, «Vector Lab», США).

Для исследования HP в биоптатах СОЖ с помощью метода ПЦР использовали тест-систему «АмплиСенс Helicobacter pylori» ЦНИИ эпидемиологии МЗ РФ (Москва).

Количественное определение пепсиногена I (ПГ I), пепсиногена II (ПГ II), гастрина-17 (Г-17) и антител класса IgG к HP в сыворотке крови человека проводили методом иммуноферментного анализа (ИФА) с помощью тест-систем фирмы «BIOHIT», (Финляндия). Оптическую плотность образцов измеряли на многоканальном спектрофотометре ELx 800 «Bio-Tek» (США) при длине волны 450 нм.

Статистическую обработку результатов исследования проводили с использованием пакета прикладных программ «Statistica 6,0» с определением средних значений, стандартной ошибки среднего, стандартного отклонения, максимальных и минимальных значений. Достоверность различия средних показателей оценивали с помощью t-критерия по Стьюденту и критерия сравнения Вилкоксона. Для многомерного статистического анализа использовали корреляционный (методы Спирмена, гамма) и дисперсионный (метод Краскела–Уоллеса) виды анализа.