ПРОСТЫЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Метод мазка. Деревянной палочкой или спичкой (но не стеклянной палочкой, которой нельзя равномерно размазать кал на стекле) из разных мест доставленного кала берут для исследования 30—50 мг (масса величиной со спичечную головку).

B мазке можно обнаружить яйца и личинки всех видов гельминтов. Обычно хорошо обнаруживаются яйца аскариды, лентеца широкого, последние в растворе глицерина спадаются и имеют вид лодочки или спущенного мяча. При слабой инвазии исследование одного мазка на предметном стекле не выявляет яйца многих гельминтов, особенно власоглава, анкилостомид и др., а также личинок стронгилоидеса.

Для обнаружения мелких яиц трематод — описторхиса, кло- норхиса и матагонимуса — мазки нужно готовить тонкиесмень- шим количеством кала и исследовать под покровным стеклом при увеличении микроскопа — окуляр 7, объектив 40.

Метод закручивания. Предложен E. С. Шульманом с соавт. (1933) для обнаружения личинок стронгилоидеса. Испражнения (2—3 г) тщательно размешивают круговыми движениями стеклянной палочкой с двойным количеством воды или физиологического раствора. Тотчас после размешивания каплю эмульсии палочкой переносят на предметное стекло. B этой капле скапливаются яйца и личинки гельминтов. Всего просматривают 8 капель под покровными стеклами при малом увеличении микроскопа. Надо полагать, что исследование 8 капель более эффективно, чем одного нативного мазка на предметном стекле, поэтому этот метод можно рекомендовать в качестве дополнения к методике обогащения (вместо нативного мазка).

Толстый мазок по Гейну. Ha предметном стекле делают мазок кала в 5—10 раз толще обычного и высушавают при комнатной температуре. Затем наносят каплю кедрового масла и исследуют под микроскопом. Кал в этом случае просветляется. Следует заметить, что сделать толстый мазок равномерной толщины из кала без добавления жидкости очень трудно и толстые места не просветляются, что значительно затрудняет исследование. Предварительное размешивание кала с 10% уксусной кислотой (палочкой в стеклянной баночке) позволяет гомогенизировать его и изготовлять равномерные толстые мазки, которые превосходно просветляются вазелиновым или каким-либо другим маслом. B таком дополнении метод Гейна можно применять для диагностики.

Толстый мазок под целлофаном. Предложен Kato, Miura в 1954 r.; в отечественных изданиях описан E.

Полоски целлофана размером 22x30 мм и толщиной 40— 50 мкм помещают не менее чем за 24 ч до анализа в 50% pac- твор глицерина. K 200 мл раствора добавляют 1 мл 3% водного раствора малахитовой зелени для снижения утомляемости глаза, которой можно пренебречь. Целлофан — особым образом обработанная целлюлоза; он гидрофилен, горит, в отличие от полиэтиленовой пленки, которая плавится на огне. Ha предметное стекло наносят 50—60 мг фекалий (около 4 мм3), покрывают их целлофановой полоской и раздавливают резиновой пробкой для получения тонкого ровного слоя, для чего нужен некоторый навык (рис. 30). Мазок оставляют на 1 ч при комнатной температуре, в жаркое время года на 30—40 мин, а в сушильном шкафу при 45° — на 15—20 мин. Выдерживание более продолжительное время ведет к чрезмерному просветлению яиц

Рис. 30. Приготовление толстого мазка под целлофаном. Ha правом стекле показан обычный нативный мазок на предметном стекле (по Ю. А. Березанцеву и E. Г. Автушенко, 1976).

анкилостомид. Метод ие пригоден для обнаружения мелких яиц трематод.

Kato в 1970 г. усовершенствовал методику и рекомендовал брать 100 мг кала для исследования и полоску целлофана размером 8,2 см2, толщиной 22 мкм. Это предельное количество кала, которое с трудом можно исследовать подобной методикой. B своей последней статье он пишет, что в таком препарате помещается фекалий в 20—30 раз больше, чем в простом нативном мазке, если считать, что в мазке используется 2—3 мг кала. Если же брать 30—50 мг фекалий, как принято у нас, то проба возрастет всего лишь в два раза.

Первоначальная методика Kato предполагала исследовать в препарате кала столько же, сколько умещается в нативном мазке на предметном стекле.

При проверке этого метода нами было установлено, что 50 мг фекалий еще можно раздавить пробкой до тонкого равномерного и прозрачного слоя, 60 мг для этих целей уже много, так как фекалии выдавливаются из-под целлофановой полости и остаются толстые, непрозрачные, а следовательно, и непро- сматриваемые места. Глицерина на пленке бывает недостаточно для просветления фекалий. Количество кала в 100 мг совершенно нельзя раздавить до нужной толщины, без того чтобы большое количество не вытеснялось за пределы целлофанового покрытия. Следовательно, можно хорошо просмотреть препарат, содержащий лишь до 50 мг кала, т. e. такое же количество, как и в нативном мазке, однако последний готовить значительно

быстрее, проще и яйца гельминтов видны в нем значительно лучше.

Большой мазок для исследования под бинокулярным микроскопом. Стереоскопический бинокулярный микроскоп позволяет исследовать нативные мазки на стекле 6x9 см, используя 200— 300 мг кала (величиной со среднюю и крупную горошину), который растирают деревянной палочкой с 50% раствором глицерина (до 15—20 капель). Мазок делают равномерным по всему стеклу и он занимает площадь около 33—34 см2. Чтобы не запачкать пальцы при передвижении стекла, мазок помещают на другое стекло несколько большего размера. Мазок просматривают в проходящем свете, для чего лампочку осветителя вставляют в нижнее гнездо микроскопа. Интенсивность освещения регулируют матовой стороной зеркала. He следует смотреть при очень ярком освещении, поле зрения нужно слегка затенить, иначе яйца гельминтов с прозрачной оболочкой (острицы, карликового цепня) не будут замечены. Правила просмотра остаются те же, что и мазка на предметном стекле.

Большой мазок просматривают без покровных стекол при увеличении 34 (окуляр 17, объектив 2) или 50 (окуляр 12,5, объектив 4). B сомнительных случаях переводят на большее увеличение.

При максимальном количестве исследуемого кала — 300 мг большой мазок содержит его в 6—10 раз больше, чем мазок на предметном стекле, следовательно, во столько же раз выше его эффективность. Большой мазок под бинокулярным микроскопом может быть вполне рекомендован как самостоятельный метод исследования (Ю. А. Березанцев, E. Г. Автушенко, 1973).

Кроме различных мазков, существуют сложные, но более эффективные методы исследования испражнений. Они позволяют отделить из большого количества испражнений (до 5,0 г и более) яйца гельминтов и сконцентрировать их, повышая тем самым эффективность анализа, даже при слабой инвазии. B основу методов обогащения положена разность удельного веса яиц гельминтов и применяемого солевого раствора. Если удельный вес яиц больше удельного веса жидкости, то яйца концентрируются в осадке, который и исследуют под микроскопом. Это—метод осаждения (седиментации). При большем удельном весе раствора яйца всплывают на поверхность жидкости, и тогда исследуют пленку. Ha этом принципе основаны методы всплывания (флотации). Из методов концентрации многие исследователи считают лучшими методы флотации для обнаружения яиц анкилостомид, власоглава и карликового цепня.

Солевые растворы, применяемые в методах флотации. Дополнительное исследование осадка по методу Фюллеборна — не единственная возможность повышения эффек- тивности в выявлении более тяжелых яиц гельминтов. Для этой цели было предложено свыше бО солевых растворовсудельным весом от 1,18 до 1,57. После поваренной соли самое большое распространение в практике получил насыщенный раствор азотнокислого натрия, предложенный E. В. Калантарян в 1927. Высокий удельный вес этого раствора (1,38) позволяет обнаружить на поверхности неоплодотворенные яйца аскариды.

Из 14 наиболее употребительных солевых растворов, по данным E. Г. Автушенко (1969), сернокислая магнезия вызывает коагуляцию исследуемого материала, последний, всплывая, образует у поверхности слой, напоминающий вату, толщиной до 2 см. B пленке видны только яйца, оказавшиеся над этим слоем. Испражнения, коагулируют также в смеси растворов поваренной соли, сернокислого магния и гипосульфита натрия. B меньшей степени образование хлопьев наблюдается в растворах гипосульфита натрия, поташа и сернокислого цинка. B жидкостях с высоким удельным весом, таких, как насыщенные растворы гипосульфита натрия (уд. в. 1,41) и поташа (уд. в. 1,57) всплывают почти все частицы кала, образуя компактный слой у поверхности, препятствующий всплыванию яиц в пленку. Особенно четко это проявляется в растворе поташа. Общее число всплывших яиц в насыщенных растворах азотнокислого аммония (преимущественно для яиц власоглава) и азотнокислого натрия (преимущественно для яиц аскариды) при подсчете через 10, 30 мин и 1 ч непосредственно в стаканчике значительно превышает число яиц, всплывающих за это же время в других растворах.

B растворах с глицерином или сахаром яйца гельминтов всплывают значительно медленнее. B первые 10 мин в пленке находили лишь около 10% яиц, обнаруживаемых впоследствии. Остальные испытанные растворы показали худшие результаты. B частности, в насыщенном растворе поваренной соли яиц всплывает в пленку в 1,5—2 раза меньше, чем в растворах аммиачной и натронной селитры. Таким образом, лучшими жидкостями для флотационного метода следует считать насыщенные растворы аммиачной (уд. в. 1,30) и натронной селитры (уд. в. 1,38).

1 ц и и. Помимо широко применяемой

Рис. 31. Петли для снятия поверхностной пленки: спиралевидная, простая, фигурная (по Ю. А. Березанцеву и E. Г Автушенко, 1976).

C п о с о б ы и с с л e д о в а н и я п о в e p x н о с т н о й п л e н - ки в методах флот; простой проволочной петли диаметром 1 см,

В. Г. Кузнецов предложил петлю в виде спирали, а Ш. И. Эпштейн — фигурную проволочную петлю, состоящую из 5 простых петелек диаметром 1 см каждая, закрепленных на одном стержне (рис. 31). Такими петлями прикасаются к поверхности жидкости и переносят часть пленки на предметное стекло.

B 15 каплях, снятых простой петлей (петля — капля), содержится 41% всех всплывших яиц аскариды и 25% яиц власоглава, а в 25 каплях соответственно 52% и 33%. Спиралевидная петля снимает больше яиц гельминтов: в 15 каплях — 32%), а в 25 каплях — 46% яиц власоглава. Фигурная петля снимает в 15 каплях 26% яиц власоглава. B фигурнойпетле не всегда заполняются сразу все 5 петелек, поэтому приходится прикасаться к поверхности жидкости всей петлей не- сколько раз, в результате чего увеличивается потеря яиц. Таким образом, лучшей из петель для снятия пленки в методе Фюллеборна следует считать спиралевидную. Она легко снимает пленку, содержит больше поверхностной жидкости с всплывшими яйцами (Ю. А. Березанцев, E. Г. Автушенко, 1973).

Большее число яиц можно снять с поверхностной пленки предметным стеклом, соприкасающимся с жидкостью, которукэ осторожно доливают пипеткой. Два предметных стекла (последовательно) снимают с поверхностной пленки больше яиц (78%), чем даже спиралевидная петля (46%). Исследованце можно ограничить просмотром только одного стекла, так как оно снимает примерно 60% всех всплывших яиц.

Однако, используя бинокулярный микроскоп, можно быстро просматривать всю поверхностную пленку прямо в стаканчике, обнаруживая любое количество всплывших яиц гельминтов. B этом случае стаканчик предварительно также следует покрывать стеклом, чтобы при микроскопировании не дрожала поверхность жидкости. Всплывшие яйца гельминтов хорошо видны, за исключением яиц карликового цепня, последние различаются с трудом и напоминают мелкие пузырьки воздуха.