ТОКСОПЛАЗМА (РОД TOXOPLASMA|

Паразиты животных и человека, возбудители токсоплазмоза, широко распространены среди млекопитающих и птиц в природных условиях. Развитие их происходит, подобно кокцидиям, в кишечном эпителии кошек, где наблюдается бесполое размножение (шизогония) и образование половых клеток (гамето- гония).

Рис. 5. Ооцисты токсоплазм в фекалиях кошки.

Ооцисты выделяются с фекалиями кошек и становятся заразительными после дозревания вне хозяина при доступе кислорода (рис. 5).

B организме других животных (млекопитающих и птиц) токсоплаз- мы размножаются продольным делением и эн- додиогенией (внутреннее почкование с образованием двух дочерних особей), как правило, в цитоплазме клеток ретику- лоэндотелиальной системы и мезотелиальных клеток.

Рис. 6. «Псевдоцисты» и свободные TOK- соплазмы в перитонеальном экссудате зараженной мыши.

При размножении большого количества токсоплазм в одной клетке хозяина (10—20 и более особей) образуется так называемая «псевдоциста» (рис. 6). Последняя по мере роста и созревания паразитов разрушается, приводя к гибели клетку. Освободившиеся паразиты (трофо- зоиты) активно проникают в новые клетки и продолжают в них деление. Таким образом, происходит быстрое накопление в организме токсоплазм в остром периоде заболевания как в свободном виде — внекле- точно, так и в виде внутриклеточных скоплений. Эти формы токсоплазм носят название пролиферативных форм.

Скопления токсоплазм в тканях мозга и в различных органах человека и животных при хроническом токсоплазмозе отличаются от псевдоцист, встречающихся при остром течении заболевания, сравнительно более толстой оболочкой.

Лабораторные методы диагностики токсоплазмоза основаны на паразитологических и иммунологических исследованиях.

Рис. 7. Токсоплазменная циста в головном мозге мыши.

Паразитологическая диагностика. Она осуществляется методом прямого микроскопирования и методом биопроб.

Метод прямого микроскопирования. Основывается на обнаружении паразитов в мазках из пунктата лимфатических узлов или биопсированных узлов, миндалин, из центрифугата спинномозговой жидкости, в мазках крови, мазках и гистологических срезах из кусочков органов трупов (головного мозга, печени, селезенки, легких). B случаях патологии беременности исследуется плацента и околоплодная жидкость (после родов).

Мазки фиксируют метиловым спиртом или смесью различных частей абсолютного этилового спирта и эфира и окрашивают по методу Романовского — Гимза. Просматривать мазки следует тщательно, так как токсоплазм в исследуемом материале бывает мало и их можно спутать с другими простейшими или грибами.

Токсоплазмы имеют полулунную или аркоподобную форму. Один конец паразита заострен, другой несколько закруглен. Ядро относительно крупное, окрашивается в рубиново-красный цвет, цитоплазма красится в голубые тона. Ядро располагается в центре паразита и занимает 1U—7з часть его тела.

Размер токсоплазм в наиболее типичной для них полулунной форме равен по длине 4—-7 мкм, по ширине 2—4 мкм. Форма и размеры паразита могут несколько варьировать.

Метод постановки биопроб на лабораторных животных. Материалом для биопроб служат центрифугат спинномозговой жидкости, пунктат лимфатических узлов или биопсированные кусочки. B случаях патологии беременности исследуется околоплодная жидкость и плацента.

Материал, взятый для биопробы, желательно использовать немедленно, но допустимо сохранение его в условиях холодильника при 2—4° не более 1—2 суток. Исследование материала из трупов следует производить возможно скорее после смерти, так как форма и состояние паразитов изменяются.

За подопытными животными наблюдают 10—12 дней, и если мыши не заболевают, то делают слепые пассажи через каждые 10—12 дней до 3—5 раз.

B положительных случаях у мышей развивается острая форма токсоплазмоза. Паразиты обнаруживаются в перитонеальном экссудате мышей и в меньшем количестве в печени, селезенке, легких.

При выделении авирулентных штаммов токсоплазм заболевание у мышей клинически не проявляется, перитонеальный экссудат если и образуется, то в небольшом количестве. Токсоплазм в нем либо не находят вообще, либо обнаруживают лишь единичные экземпляры. Через 2—3 недели в головном мозге мышей обнаруживаются цисты токсоплазм. Для их выявления кусочек мозга раздавливают между предметным и покровным стеклами и исследуют под малым увеличением микроскопа. Кроме того, можно готовить мазки и отпечатки мозга и после фиксации окрашивать их по Романовскому — Гимзе.

Для постановки биопроб используют также 6—8-дневные куриные эмбрионы с обычной методикой заражения в хорионаллантоисную оболочку.

Иммунологические исследования. Проводятся с помощью нескольких наиболее распространенных реакций: реакция с красителем Сэбина — Фельдмана (РСФ), реакция связывания ком- нлемента (РСК), реакция непрямой гемагглютинации (РНГА), а также используя метод люминесцирующих (флюоресцирующих) антител (МЛА), аллергическую пробу (внутрикожная проба — ВКП), титрационную пробу.

Реакция с красителем Сэбина — Фельдмана. Она высоко чувствительна, основывается на том, что под влиянием специфических антител сыворотки крови, к которой добавлен щелочной раствор метиленовой синьки, цитоплазма паразитов не окрашивается синькой.

Для постановки реакции требуется: 1) штамм токсоплазм (свежий перитонеальный экссудат, зараженной токсоплазмами мыши), 2) свежая сыворотка здорового человека, содержащая добавочный фактор (активатор), 3) положительная (содержащая антитела против токсоплазм) сыворотка человека или животного, 4) щелочной раствор метиленовой синьки, 5) испытуемые сыворотки.

Антитела этой реакцией выявляются через 1—2 недели после заражения. Спустя 3—4 недели титр антител значительно возрастает. Длительность сохранения положительной РСФ определяется годами. Диагностическое значение большинством авторов придается положительной реакции в титре 1 : 10 и выше.

Неудобство этой реакции состоит в том, что в ней используется свежий штамм токсоплазм. Методика постановки реакции довольно сложная, требует значительного опыта. Подробное изложение ее дано в труде Д. H. Засухина (1966).

Реакция связывания комплемента (PCK)-Cno- мощью этой реакции специфические антитела начинают выявляться спустя 2—3 недели после заражения токсоплазмами и регистрируются в течение 2—4 лет. По данным Thalhammer (1965), PCK по чувствительности уступает реакции с красителем. Эту реакцию ставят по стандартной методике.

Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА).

Метод флюоресцирующих антител. Высоко чувствителен. Основан на выявлении антител с помощью токсо- плазменного антигена и специфических сывороток, меченных флюорохромами, чаще всего изотиоцианатом флюоресцеина. B настоящее время применяется реакция иммунофлюоресценции в непрямом варианте.

Внутрикожная (аллергическая) проба. Позволяет обнаружить аллергию к токсоплазменному белку. Положительная проба указывает на перенесенную ранее или текущую инфекцию. Эта реакция появляется в конце 4-й недели после заражения и сохраняется, по-видимому, пожизненно. Методика постановки состоит в следующем. B кожу ладонной поверхности предплечья или наружной поверхности плеча ту беркулиновым шприцем вводят 0,1 мл токсоплазмина (аллергена), а в качестве контроля 0,1 мл физиологического раствора в ту же руку на расстоянии 5—7 см от места введения аллергена. Учет реакции производится через 24 и 48 ч. B положительных случаях через 24 ч на месте введения аллергена появляется гиперемия и инфильтрация кожи, которая определяется пальпаторно. Размер очага инфильтрации не менее 10 мм в диаметре. Через 48 ч инфильтрация не исчезает и не уменьшается.

Различают резко положительную реакцию (++++) при диаметре инфильтрата более 20 мм; положительную реакцию (+++) при наличии инфильтрата от 15 до 20 мм в диаметре; слабоположительную реакцию (++) при наличии инфильтрата от 10 до 15 мм в диаметре; отрицательную реакцию (+) при диаметре инфильтрата менее 10 мм или его отсутствии.

Внутрикожная проба специфична, но по ней трудно судить об активности процесса, вследствие длительного ее сохранения. Быстро возникающие реакции и исчезающие по прошествии 40—48 ч считаются неспецифическими. У грудных детей эта проба не применяется. У пожилых людей иногда наблюдается слабая реакция, поэтому она может быть неправильно истолкована (Thalhammer, 1965).

Титрационная проба. При данной пробе в кожу ладонной поверхности предплечья вводят по 0,1 мл токсоплазмина различных разведений (1 : 10, 1 : 100, 1 : 1000, 1 : 10 000,

1 : 100 000) каждого разведения. Инъекции делают с интервалами в 2—3 см. Результаты пробы учитывают через 24 и 48 ч. При этом измеряют диаметр инфильтрации на месте каждой инъекции.

Токсоплазмин разводят физиологическим раствором в стерильных пробирках или во флаконах из-под пенициллина.

Эта проба позволяет судить об активности процесса и о ходе лечения, в результате которого наблюдается десенсибилизация организма больного.

У лиц без клинических проявлений болезни или при большой давности инфицирования токсоплазмами уже при разведении 1 : 10 проба может быть отрицательной. При недавнем заражении у лиц с клиническими проявлениями токсоплазмоза положительная реакция может быть до разведения 1 : 10 000 и даже 1 : 100 000. B ходе лечения (вакцинотерапия) при десенсибилизации организма положительная реакция может уменьшаться с разведения 1 : 10 000 до 1 : 10 или даже стать отрицательной (А. П. Казанцев, 1965).

Антиген и токсоплазмин, используемые в реакциях, в настоящее время готовятся из перитонеального экссудата белых мышей в Институте эпидемиологии и микробиологии им. Гамалея AMH CCCP и хранятся в запаянных ампулах. Используют их согласно инструкции, приложенной к серии антигена или токсоплазмина.