<<
>>

Питательные потребности грибов рода Malassezia и условия для их культивирования

Разработка рецептуры питательных сред для культивирования грибов рода Malassezia базируется прежде всего на сведениях о питательной потреб­ности этих микроорганизмов.

Длительное время считалось, что дрожжи рода Malassezia вообще не могут быть выделены в культуру, т.к.

была неизвестна их липид- зависимость. Впервые потребность этих микроорганизмов в «жироподобных веществах» была установлена R. Benham в 1939 г. На средах, не содержащих липидов, способен расти лишь один вид - М. pachydermatis, однако в присут­ствии липидов его рост существенно стимулируется [108].

Позже было установлено, что для роста грибов рода Malassezia необхо­димо наличие в питательной среде жирных кислот с длиной цепи С12-С24, ко­торые грибы рода Malassezia не способны синтезировать самостоятельно. Эти компоненты встречаются в натуральных маслах - оливковом, кукуруз­ном, соевом, подсолнечном. В качестве источника липидов также могут быть использованы олеиновая, арахидиновая, стеариновая, пальмитиновая кисло­ты и Твины [116].

Показано, что в процессе гидролиза оливкового масла образуются сво­бодные жирные кислоты и этиловые эфиры. Значение синтеза этиловых эфи­ров дрожжами рода Malassezia пока не интерпретировано [120].

За исключением потребности в липидах, питательные потребности гри­бов рода Malassezia довольно ограничены. Они не нуждаются в микроэле­ментах, витаминах, электролитах, не способны ферментировать сахара. В ка­честве единственного источника азота они способны использовать соли ам­мония (NH4CI, NH4H2SO4, (NH4)2SO4), однако не ассимилируют KNO3. Также дрожжи успешно ассимилируют мочевину, креатин, креатинин, практически все аминокислоты, за исключением цистеина [121].

У грибов рода Malassezia отсутствует потребность в углеводах, а в каче­стве единственного источника углерода могут выступать липиды. Тем не ме­нее М. pachydermatis в качестве источников углерода может ассимилировать глюкозу, маннит, глюцит, в то время как лактоза и молочная кислота не ас­симилируются.

Наличие в среде глюкозы стимулирует рост дрожжей [116].

В исследованиях Kiss G. [101] большинство штаммов М. pachydermatis ассимилировали глюкозу, маннит, сорбит, пептон, но не ассимилировали этанол. Этот же автор обнаружил у некоторых штаммов потребность в нико­тиновой кислоте.

Представители М. pachydermatis способны расти в диапазоне pH 4,0- 8,0; при значениях pH 1,0-3,0 и 9,0-10,0 рост ингибируется. Существенных отличий в энергии роста при значениях pH 5.0, 6.0, 7.0, 8.0 не обнаружено [П7].

Грибы рода Malassezia растут в аэробных условиях, но также способны к росту при микроаэрофильных и анаэробных условиях [75].

R. Bond [40] сообщает, что добавление в атмосферу инкубирования 5- 10% диоксида углерода существенно стимулировало частоту выделения М. pachydermatis на среде Сабуро.

Для культуральной диагностики грибов рода Malassezia различными ав­торами был предложен целый ряд питательных сред. В работе J. Leeming & F. Notman [105], в сравнительном аспекте были изучены среды, предложен­ные Faergmann & Fredriksson (1980), van Abbe (1964), Ushijima (1981), Leem­ing & Notman (1987). Наилучшие ростовые свойства проявила среда Лемин- га-Нотмана (Leeming & Notman), в состав которой входил бактериологиче­ский пептон, глюкоза, дрожжевой экстракт, бычья желчь, глицерол, глицеро- ла моностеарат, твин-60, цельное коровье молоко и агар-агар. Температур­ный оптимум культивирования посевов составлял 34°С, срок культивирова­ния - 14 сут. Эта среда получила широкое распространение в диагностике

Мз/б755сз/а-инфекций. В частности, ее применяли J. Faergmann [75], М. Pechere [138].

, Blanco J. [31] сообщает, что при выделении грибов рода Malassezia от больных отитом собак, наилучшие результаты были получены при использо­вании колумбийского кровяного агара и среды MacConkey. Посевы инкуби­ровали 24 ч. при 37°С. Эти же среды использовал М. Crespo [57].

М. Crespo [58] для выделения Malassezia spp. высевал материал парал­лельно на среду Leeming & Notman и среду Сабуро с добавлением оливково­го масла (10 мл/л).

Дрожжевые колонии, полученные на липид-содержащих средах, затем пересевались на среду Сабуро без добавок, для определения липид-зависимости изолятов.

D. Morris [129] также использовал среду Сабуро, на поверхность кото­рой помещалась капля оливкового масла. Ватный тампон с материалом из ушного прохода помещали в каплю масла, после чего смоченным в масле тампоном делали штрих по поверхности среды.

F. Bernardo [29] для первичного выделения Malassezia использовал дрожжевой мальт-агар (Yeast malt agar, YMA), с добавлением антибиотика хлорамфеникол (25 мг/мл). Посевы инкубировались при 37°С в течение 5-10 сут.

По данным R. Lorenzini [107], наилучшими ростовыми свойствами для М. pachydermatis обладает декстрозная питательная среда с добавлением 1,5% дрожжевого экстракта. Рост грибов обнаруживался уже через 24 ч., а жизнеспособность сохранялась до 3-х месяцев.

Многие авторы используют в своих исследованиях для выделения гри­бов рода Malassezia модифицированну среду Диксона (mDixon) [58, 114, 52, 147, 166, 37]. В состав среды входят мальтозный экстракт, пептон, бычья желчь, Твин-40, глицерин, олеиновая кислота и агар-агар. Температура куль­тивирования - 32-37°С. М. Girao [94] считает эту среду оптимальной для дли­тельного хранения (9 мес.) культур Malassezia spp.

Однако A. Nell [96] не удалось выделить М. sympodialis на кровяном ага­ре, агаре Сабуро и агаре Диксона. Культура гриба была получена только на среде Сабуро, обогащенной олеиновой кислотой.

Значительный интерес представляют попытки создания хромогенной питательной среды для экспресс-диагностики Мз/йотег/я-инфекций. Т. Ка- neko [167] модифицировал коммерческую хромогенную среду для выделения грибов рода Candida - CHROMagar Candida, включив в нее компоненты сре­ды Леминга-Нотмана (LN) - бычью желчь, моностеарат глицерола и Твин-60. На этой среде (LN-CHROM) грибы рода Malassezia образовывали гладкие колонии от розового до темно-красного цвета. Ростовые свойства среды были эквивалентны таковым у среды Леминга-Нотмана. Причем модификация со­става среды никак не отразилась на свойствах колоний грибов рода Candida, что делает ее пригодной для одновременной изоляции и идентификации как грибов рода Malassezia, так и Candida.

Итак, в настоящее время предложено несколько питательных сред для культивирования грибов рода Malassezia, однако среди авторов нет единого мнения, какая из них является оптимальной для рутинных диагностических исследований. Немаловажным фактором для повседневной диагностической практики является доступность среды, простота изготовления, стабильность ее состава.

1.5.

<< | >>
Источник: Ершов Петр Петрович. Этиологическая значимость дрожжевых грибов рода Malassezia при кожных заболеваниях животных. Диссертация на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук. Москва - 2008. 2008

Скачать оригинал источника

Еще по теме Питательные потребности грибов рода Malassezia и условия для их культивирования:

  1. ОГЛАВЛЕНИЕ
  2. Питательные потребности грибов рода Malassezia и условия для их культивирования
- Акушерство и гинекология - Анатомия - Андрология - Биология - Болезни уха, горла и носа - Валеология - Ветеринария - Внутренние болезни - Военно-полевая медицина - Восстановительная медицина - Гастроэнтерология и гепатология - Гематология - Геронтология, гериатрия - Гигиена и санэпидконтроль - Дерматология - Диетология - Здравоохранение - Иммунология и аллергология - Интенсивная терапия, анестезиология и реанимация - Инфекционные заболевания - Информационные технологии в медицине - История медицины - Кардиология - Клинические методы диагностики - Кожные и венерические болезни - Комплементарная медицина - Лучевая диагностика, лучевая терапия - Маммология - Медицина катастроф - Медицинская паразитология - Медицинская этика - Медицинские приборы - Медицинское право - Наследственные болезни - Неврология и нейрохирургия - Нефрология - Онкология - Организация системы здравоохранения - Оториноларингология - Офтальмология - Патофизиология - Педиатрия - Приборы медицинского назначения - Психиатрия - Психология - Пульмонология - Стоматология - Судебная медицина - Токсикология - Травматология - Фармакология и фармацевтика - Физиология - Фтизиатрия - Хирургия - Эмбриология и гистология - Эпидемиология -