Анализ взаимосвязи полиморфных вариантов генов TYMS и ТР53 с клинико-морфологическими характеристиками опухоли и с рецидивированием рака желудка
Для определения возможности использования полиморфизмов в качестве прогностического критерия клинического течения опухоли у всех 80 больных изучена ассоциация между полиморфными вариантами генов TYMS и ТР53 и клинико-морфологическими характеристиками опухоли, такими как степень дифференцировки опухоли, тип опухоли по классификации Р.Lauren,
поражение регионарных лимфоузлов, возраст больных и локализация опухоли.
У 58 больных, которым проводилась адьювантная химиотерапия, изучена взаимосвязь между полиморфными вариантами генов TYMS и ТР53 и частотой развития рецидива рака желудка.Результаты молекулярно-генетического исследования представлены в таблицах 20, 21 и 22.
Таблица 20. Результаты исследования полиморфизмов в 5’- и 3’- некодирующих районах гена TYMS в различных клинических группах пациентов с местно-распространенным раком желудка.
Клинические группы | N | 3R/3 R | 2R/2 R | 3R/2 R | C/C | С/G | G/G | A/A | А/А-6 | A-6/A-6 |
всего | 80 | 34 | 12 | 31 | 12 | 37 | 31 | 27 | 39 | 10 |
Высоко/умереннодиффер аденокарцинома (G1,G2) | 35 | 13/34 | 3/34 | 18/34 | 5/35 | 18/35 | 12/35 | 12/35 | 14/35 | 9/35 |
Низкодифференцирован аденокарцинома(G3) | 31 | 15/31 | 6/31 | 10/31 | 5/31 | 11/31 | 15/31 | 10/30 | 19/30 | 1/30 |
Перстневидно-клеточный рак (G4) | 14 | 6/12 | 3/12 | 3/12 | 2/14 | 8/14 | 4/14 | 5/11 | 6/11 | 0/11 |
Р (KW) | 0,590 | 0,317 | 0,103 | 0,975 | 0,292 | 0,351 | 0,758 | 0,265 | 0,015* | |
Возраст больных 60 лет | 54 | 24/54 | 9/54 | 21/54 | 9/54 | 27/54 | 18/54 | 17/50 | 26/50 | 7/50 |
Р (KW) | 0,429 | 0,549 | 0,234 | 0,563 | 0,865 | 0,832 | 0,268 | 0,423 | 0,327 | |
Кардия | 9 | 2/9 | 2/9 | 5/9 | 1/9 | 2/9 | 6/9 | 3/9 | 5/9 | 1/9 |
Тело | 44 | 22/43 | 8/43 | 13/43 | 10/44 | 19/44 | 15/44 | 17/42 | 22/42 | 3/42 |
Антральный отдел | 27 | 10/25 | 2/25 | 13/25 | 1/27 | 16/27 | 10/27 | 7/25 | 12/25 | 6/25 |
Р (KW) | 0,252 | 0,076 | 0,131 | 0,101 | 0,094 | 0,314 | 0,275 | 0,559 | 0,561 | |
Метастатическое поражение регионарных лимфоузолов (N1,N2,N3) | 50 | 22/50 | 11/50 | 17/50 | 9/50 | 21/50 | 20/50 | 17/49 | 27/49 | 5/49 |
Отсутствие метастазов в регионарные лимфоузлы (N0) | 30 | 12/27 | 1/27 | 14/27 | 3/28 | 16/28 | 11/28 | 10/27 | 12/27 | 5/27 |
Р (F) | 1,00 | 0,047 * | 0.149 5 | 0,520 | 0,211 | 1,00 | 1,00 | 0,473 | 0,313 | |
Интестинальный рак | 35 | 14/34 | 3/34 | 17/34 | 5/35 | 18/35 | 12/35 | 12/35 | 15/35 | 8/35 |
Диффузный рак | 45 | 20/43 | 9/43 | 14/43 | 7/45 | 19/45 | 19/45 | 15/41 | 24/41 | 2/41 |
Р (F) | 0.652 | 0.209 | 0.161 | 1.00 | 0.499 | 0.497 | 1.00 | 0.249 | 0.037* | |
всего | 58 | 20 | 12 | 16 | 11 | 21 | 26 | 18 | 30 | 6 |
Рецидив в течение 3х лет после операции на фоне проведения ХТ | 30 | 18/30 | 7/30 | 5/30 | 5/30 | 8/30 | 17/30 | 9/28 | 15/28 | 4/28 |
Отсутствие рецидива в течение 3х лет после операции на фоне проведения ХТ | 28 | 12/29 | 5/28 | 11/28 | 6/28 | 13/28 | 9/28 | 9/26 | 15/26 | 2/26 |
Р (F) | 0.293 | 0.749 | 0.078 | 0.743 | 0.172 | 0.071 | 1.00 | 1.00 | 0.670 |
Таблица 21.
Результаты исследования сочетанных полиморфизмов в 5’- некодирующих районах гена TYMS в различных клинических группах пациентов с местно-распространенным раком желудка.Клинические группы | всего | 3G/3G | 3G/3C | 3C/3C | 2G/3G | 2G/3C |
всего | 80 | 4 | 18 | 12 | 14 | 17 |
Высоко/умереннодиффер аденокарцинома (G1,G2) | 35 | 0/33 | 8/33 | 5/33 | 7/33 | 10/33 |
Низкодифференцированная аденокарцинома G3 | 31 | 2/30 | 6/30 | 5/30 | 7/30 | 4/30 |
Перстневидноклеточный рак G4 | 14 | 2/14 | 4/14 | 2/14 | 0/14 | 3/14 |
Р (KW) | 0,120 | 0,814 | 0,975 | 0,149 | 0,272 | |
Возраст больных 60 лет | 54 | 3/54 | 12/54 | 9/54 | 10/54 | 11/54 |
Р (KW) | 0,655 | 0,928 | 0,749 | 0,988 | 0,589 | |
Кардия | 9 | 1/9 | 0/9 | 1/9 | 3/9 | 2/9 |
Тело | 44 | 1/43 | 11/43 | 10/43 | 5/43 | 8/43 |
Антральный отдел | 27 | 2/25 | 7/25 | 1/25 | 6/25 | 7/25 |
Р (F) | 0,42 | 0,210 | 0,102 | 0,206 | 0,67 | |
Метастатическое поражение регионарных лимфоузолов (N1,N2,N3) | 50 | 2/47 | 11/47 | 9/47 | 7/47 | 7/47 |
Отсутствие метастазов в регионарные лимфоузлы (N0) | 30 | 2/30 | 7/30 | 3/30 | 7/30 | 10/30 |
Р (F) | 0,640 | 1,00 | 0,348 | 0,377 | 0,089 | |
Интестинальный рак | 35 | 2/34 | 7/34 | 5/34 | 7/34 | 10/34 |
Диффузный рак | 45 | 2/43 | 11/43 | 7/43 | 7/43 | 7/43 |
Р (F) | 1,00 | 0,787 | 1,00 | 0,767 | 0,181 | |
всего | 58 | 6 | 13 | 11 | 8 | 8 |
Рецидив в течение 3х лет после операции на фоне проведения ХТ | 30 | 6/30 | 7/30 | 5/30 | 4/30 | 1/30 |
Отсутствие рецидива в течение 3х лет после операции на фоне проведения ХТ | 28 | 0/28 | 6/28 | 6/28 | 4/28 | 7/28 |
Р (F) | 0.024* | 1.000 | 0.734 | 1.000 | 0.023* |
Таблица 22.
Результаты исследования полиморфизмов гена ТР53 в различных клинических группах пациентов с местно-распространенным раком желудка.Клинические группы | N | А/А | A/A+16 | Arg/Arg | А^/Pro | Pro/Pro |
всего | 80 | 63 | 17 | 42 | 31 | 7 |
Высоко/умереннодиффер аденокарцинома (G1,G2) | 35 | 28/35 | 7/35 | 20/35 | 14/35 | 1/35 |
Низкодифференцированная аденокарцинома(G3) | 31 | 24/31 | 7/31 | 17/31 | 10/31 | 4/31 |
Перстневидноклеточный рак^4) | 14 | 11/14 | 3/14 | 5/14 | 7/14 | 2/14 |
Р (KW) | 0,968 | 0,381 | 0,521 | 0,259 | ||
Возраст больных 60 лет | 54 | 43/54 | 11/54 | 30/54 | 19/54 | 5/54 |
Р (KW) | 0,356 | 0,512 | 0,19 | 0,484 | ||
Кардия | 9 | 8/9 | 1/9 | 5/9 | 3/9 | 0/11 |
Тело | 44 | 35/44 | 9/44 | 22/44 | 19/44 | 2/15 |
Антральный отдел | 27 | 20/27 | 7/27 | 15/27 | 9/27 | 5/54 |
Р (KW) | 0,634 | 0,886 | 0,6706 | 0,798 | ||
Метастатическое поражение региональных лимфоузолов (N1,N2,N3) | 50 | 39/50 | 11/50 | 29/50 | 16/50 | 5/50 |
Отсутствие метастазов в региональные лимфоузлы (N0) | 30 | 24/30 | 6/30 | 13/30 | 15/30 | 2/30 |
P (F) | 1,00 | 0,250 | 0,155 | 0,705 | ||
Интестинальный рак | 35 | 27/35 | 8/35 | 19/35 | 14/35 | 2/35 |
Диффузный рак | 45 | 36/45 | 9/45 | 23/45 | 17/45 | 5/45 |
Р (F) | 0,788 | 1,00 | 1,00 | 0,459 | ||
всего | 58 | 45 | 13 | 31 | 21 | 6 |
Рецидив, генерализация в течение 3х лет после операции на фоне проведения ХТ | 30 | 24 | 6 | 17 | 7 | 6 |
Отсутствие рецидива в течение 3х лет после операции на фоне проведения ХТ | 28 | 21 | 7 | 14 | 14 | 0 |
Р (F) | 0.756 | 0.756 | 0.054* | 0,031* |
Примечание: * - различия достоверны, N - число наблюдений.
В ячейках с численными значениями указано количество определенных изменений по отношению к количеству информативных случаев в группе. р(F) - сравнение групп с помощью двустороннего точного критерия Фишера (уровень значимости а=0.05), р (KW) - сравнение групп с помощью дисперсионного анализа Краскела-Уоллиса. Генотип 2G/2G не рассмотрен в сочетанных генотипах, т.к. идентичен с группой 2R/2R.Изучение взаимосязи полиморфных вариантов гена TYMS и клиникоморфологических характеристик опухоли
Мы попытались определить молекулярно-генетические параметры, которые можно использовать в клинической практике для выявления пациентов с морфологически неблагоприятными в отношении прогноза типами рака желудка, что может помочь в определении дальнейшей тактики лечения, выбора адекватного объема оперативного пособия, а также послеоперационного мониторинга больных.
Проведен анализ частоты встречаемости полиморфизмов гена TYMS, степени дифференцировки опухоли и классификации рака желудка по классификации Р.Lauren у 80 больных. По степени дифференцировки больные были разделены на три группы в зависимости от гистологического типа опухоли: в первую группу объеденены пациенты с высоко - и умеренно дифференцированной аденокарциномой (G1+G2), во вторую вошли с низкодифференцированной аденокарциномой (G3), в третью больные, у которых опухоль имела строение перстневидно-клеточного рака. По
классификации Р.Lauren - на группу инфильтративного и диффузного рака (таблицы 20 и 21).
Достоверные различия определены для больных, имеющих полиморфизмы в 3'UTR области гена TYMS. Отмечено, что генотип А-
6/А-6 достоверно чаще встречается при высоко- и умереннодифференцированных аденокарциномах (р=0,015), а также при интестинальном типе рака желудка по классификации Lauren (р=0,037). Полученные данные дают нам возможность предполагать, что полиморфизм A- 6/A-6 может являться фактором благоприятного прогноза для больных местно-распространенным раком желудка (таблица 20).
На рисунках 20 и 21 представлена частота встречаемости полиморфизмов 3' региона по делециям при различных гистологических типах опухоли и типах рака по классификации Р.Lauren.
Рисунок 20.
Сравнение частоты встречаемости 3' UTR полиморфизмов в зависимости от степени дифференцировки опухоли.Примечание: G1- высокодифференцированная аденокарцинома, G2 -
умереннодифференцированная аденокарцинома, G3 - низкодифференцированная аденокарцинома, ПКР-перстневидно-клеточный рак.
Рисунок 21. Сравнение частоты встречаемости 3' UTR полиморфизмов в зависимости от типа рака желудка по классификации Р. Lauren.
Статистически значимой разницы между частотой встречаемости остальных полиморфизмов гена TYMS, в том числе сочетанных, степенью
дифференцировки опухоли и типами рака по классификации Р. Lauren
не получено (таблицы 20 и 21).
Низкая степень дифференцировки опухоли (недифференцированный рак, перстневидно-клеточный рак), а также диффузный тип рака желудка по
Р. Lauren, имеющие наиболее агрессивный характер роста, относятся к неблагоприятным прогностическим факторам и могут являться причиной неудовлетворительных результатов лечения данной категории пациентов в связи с прогрессированием заболевания: местный рецидив и генерализация процесса [89, 123].
Различия в клиническом течении двух основных типов рака желудка объясняются морфологическими особенностями опухолей. Высокая пролиферативная активность клеток интестинального рака определяет высокую скорость их роста, а более высокая тканевая дифференцировка и тесная связь клеток друг с другом ведут к меньшей инвазивности, чем обеспечивается возможность радикальной операции. Диффузный тип рака обладает худшей тканевой дифференцировкой, что ведет к слабой связи клеток друг с другом, к высокой инвазивности диффузных раков, что, в свою очередь, определяет трудность радикального оперативного вмешательства и объясняет более низкий процент 5-летней выживаемости [89]. Между данными типами рака существуют различия на молекулярно -генетическом уровне. Интестинальный тип чаще развивается у пациентов после предраковых повреждений, возможно, временной фактор приводит к накоплению генетических изменений, и как следствие, хромосомная нестабильность чаще развивается при этом типе рака [63].
Диффузный рак имеет раннюю манифестацию и характеризуется мультифокальными очагами в слизистой желудка. Вероятно,преимущественным механизмом его развития являются не структурные повреждения ДНК, а эпигенетическая инактивация [153].
В нашем исследовании мы выделили в отдельную группу
гистологический тип опухоли рака желудка, отличающийся наличием перстневидных клеток (signet ring) - перстневидно-клеточный рак (ПКР). Перстневидно-клеточный рак имеет низкую дифференцировку опухолевых клеток, и характеризуется наличием специфических перстневидных клеток. Этот тип рака обладает особой агрессивностью клинического поведения, которую связывают с наличием первично-множественных опухолевых очагов, высокими темпами опухолевого роста, выраженным внутристеночным распространением, ранней лимфогенной и перитонеальной диссеминацией, в связи с чем, некоторые авторы выделяют его в отдельную клиническую группу [104,123]. Мы не нашли достоверной ассоциации между частотой исследуемых полиморфизмов генов TYMS и ТР53 и перстневидно-клеточным раком. Однако, генотип А-6/А-6, который достоверно чаще определялся у больных с хорошо дифференцированными опухолями, у пациентов с перстневидно-клеточным раком не определялся ни в одном случае.
У пациентов с генотипом А-6/А-6 достоверно чаще выявляются формы рака желудка с более благоприятным течением. Есть данные, что делеция 6 нуклеотидов 3’UTR гена TYMS приводит к дестабилизации его РНК, и связана с низкой экспрессией ТС [111]. В исследованиях, где изучалась взаимосвязь экспрессии ТС с клинико-морфологическими характеристиками рака желудка, показано, что у больных с высокодифференцированным раком экспрессия фермента ниже [65], что косвенно подтверждает наши результаты.
В исследовании проведен анализ частоты встречаемости полиморфизмов гена TYMS и метастатического поражения регионарных лимфоузлов у 80 больных для определения возможности использования генотипирования гена TYMS в качестве фактора для оценки вероятности метастазирования рака желудка в регионарные лимфоузлы. Больные были выделены в две группы: в первую вошли пациенты, у которых отсутствовало метастатическое поражение регионарных лимфоузлов, выявленное при плановом гистологическом исследовании операционного материала; во вторую - пациенты с наличием метастазов в регионарных лимфоузлах (таблицы 20 и 21).
Анализ показал, что у пациентов, имеющих вариант распределения тандемного повтора 2R/2R, расположенного в 5’UTR гена TYMS, достоверно чаще (р=0,047) выявляется метастатическое поражение регионарных лимфоузлов, выявленное при гистологическом исследовании операционного материала (N1,N2,N3) (таблица 20).
На рисунке 22 представлена частота встречаемости полиморфизмов по тандемным повторам в 5' нетранслируемой области у пациентов с метастатически пораженными или интактными лимфоузлами.
Рисунок 22. Сравнение частоты встречаемости 5'UTR
полиморфизмов в зависимости от метастатического поражения
лимфоузлов.
По остальным полиморфизмам гена TYMS, в том числе и сочетанным, достоверной взаимосвязи с поражением лимфоузлов получено не было (таблицы 20 и 21).
Важным клиническим параметром, определяющим тактику лечения больного, является лимфогенное метастазирование опухоли. Информация на дооперационном этапе о возможности метастатического поражения лимфоузлов может позволить правильно планировать объем оперативного вмешательства и решить вопрос о необходимости и виде проведения химиотерапии на до - и послеоперационном этапе.
Нам впервые удалось показать, что определенные полиморфные варианты гена TYMS, в частности наличие тандемного повтора 2R/2R, достоверно связаны с возможностью метастазирования в регионарные лимфоузлы. Ранее, у других авторов, при изучении корреляции полиморфизмов и экспрессии ТС c клинико-морфологическими характеристиками опухоли, в частности с метастатическим поражением лимфоузлов, достоверных различий получено не было [65].
Конечно, метастазирование является сложным процессом, в котором участвует несколько генных сетей, но, вероятно низкий уровень экспрессии ТС, который проявляется при полиморфизме 2R/2R, может участвовать в развитии метастатического поражения и более агрессивного поведения опухоли.
Исходя из полученных данных, генотип 2R/2R можно расценивать, как фактор, ассоциированный с неблагоприятным прогнозом при раке желудка относительно лимфогенного распространения опухолевого процесса, который связан с большим риском развития регионарных метастазов у пациентов. Поэтому наличие у больного генотипа 2R/2R в сочетании с другими маркерами и клиническими факторами может свидетельствовать о необходимости выполнения расширенного объема лимфаденэктомии и проведении химиотерапии в послеоперационном периоде.
Изучение взаимосвязи полиморфных вариантов гена ТР53 и клиникоморфологических характеристик опухоли
Проведен анализ частоты встречаемости двух полиморфных вариантов гена ТР53 и клинико-морфологических характеристик рака желудка у 80 больных. Мы не обнаружили какой-либо статистически значимой взаимосвязи между полиморфизмами гена ТР53 и такими характеристиками опухоли, как степень дифференцировки, тип рака по классификации Р.Lauren, поражением регионарных лимфоузлов, возраста больных и локализации опухоли (таблица 22).
Изучение полиморфных вариантов гена ТР53 и TYMS и эффективности проведенной химиотерапии на основе 5-ФУ
Проведен статистический анализ частоты встречаемости полиморфизмов гена TYMS и ТР53 и частоты развития рецидива рака желудка в течение первых 3 -х лет после радикальной операции на фоне химиотерапии на основе 5-ФУ. Поскольку полиморфные замены в ДНК гена определяют активность ТС, а активность фермента влияет на чувствительность к химиотерапии, исследование проведено у 58 больных, которым было проведено комбинированное лечение. Определяли возможности использования
полиморфизмов гена в качестве дополнительного фактора, определяющего эффективность проводимого лечения у больных местно-распространенным раком желудка, а также фактора индивидуальной чувствительности к химиотерапии. Больные были разделены на две группы. В одну группу вошло 30 больных, у которых за время наблюдения выявлен рецидив заболевания (местный рецидив, канцероматоз брюшины, отдаленные метастазы). В другую группу вошло 28 пациентов, у которых в процессе наблюдения не выявлено прогрессирования заболевания (таблицы 20,21,22). Медиана наблюдения составила 33 месяца (от 4 до 40 месяцев).
В результате проведенного исследования сочетанных полиморфизмов гена TYMS 5'UTR VNTR+SNP определено, что у больных с генотипом 3G/3G на фоне адъювантной химиотерапии на основе 5 -ФУ в течение первых 3 -х лет после радикальной операции достоверно чаще встречается рецидив заболевания (р=0,024). При этом сочетанный генотип 2G/3C достоверно чаще встречается (р=0,023) в группе пациентов, у которых на фоне комбинированного лечения в течение первых 3 -х лет после операции не возникло рецидива заболевания (таблица 21). Среди полиморфизмов 5'UTR VNTR следует обратить внимание на генотип 3R/2R, который чаще определялся у больных с отсутствием прогрессирования заболевания с тенденцией к достижению достоверности (р=0,078), а среди полиморфизмов 5'UTR SNP на генотип G/G, наиболее часто встречаемый при рецидивировании также с тенденцией к достижению достоверности (р=0,071) (таблица 20) .
На рисунке 23 представлены частоты встречаемости сочетанных полиморфизмов гена TYMS у пациентов в зависимости от частоты возникновения рецидива заболевания в течение первых 3 -х лет после радикальной операции на фоне проводимого комбинированного лечения на основе производных фторпиримидинов у больных местно-распространенным
раком желудка.
■ Отсутствие рецидива в течение Зх лет после операции на фоне проведения XT
■ Рецидив в течение Зх лет после операции на фоне проведения XT
3G/3G 3G/3C ЗС/ЗС 2G/3G 2G/3C
Рисунок 23. Сравнение частоты встречаемости 5'UTR VNTR+SNP полиморфизмов в зависимости от частоты возникновения рецидива рака желудка.
Среди остальных полиморфизмов гена TYMS статистически значимых различий между частотой их встречаемости и рецидивированием не получено (таблицы 20 и 21).
На функциональную активность фермента TC оказывают влияние полиморфизмы, которые находятся в кодирующей и регуляторной областях и участвуют в регуляции экспресоди (рисунок 24).
Рисунок 24. Полиморфизмы гена TYMS, ассоциированные с изменением экспрессии.
Было показано, что аллель, содержащий 2 повтора (2R), характеризуются более низкой экспрессией белка и, соответственно, более низкой ферментативной активностью тимидилатсинтазы, чем аллель, содержащий 3 повтора (3R) [96,97,98]. Особое значение уровень активности TC приобретает в быстро делящихся клетках, поскольку именно в них и осуществляется основная функция этого фермента. В связи с чем, более высокая экспрессия TC может приводить к повышению резистентности к 5 -ФУ, откуда следует, что 3R и G аллели связаны с худшим ответом на терапию 5-ФУ и, соответственно, с высоким риском развития рецидива [79,128]. В зависимости от уровня экспрессии ТС, выделяют генотипы с высоким и низким уровнем экспрессии. К генотипам с высоким уровнем экспрессии ТС относят: 2G/3G, 3C/3G, 3G/3G, к генотипам с низкой экспрессией ТС: 2R/2R, 2R/3C, 3C/3C [74,77,142].
Полученные нами результаты согласуются с другими исследованиями, т.к. генотипы 3G/3G и G/G относятся к неблагоприятным генотипам с высоким уровнем экспрессии ТС, что связано с худшим ответом на химиотерапию 5- ФУ и, соответственно, худшим прогнозом заболевания. В то время как генотипы 2G/3C и 2R/2R связаны с низким уровнем экспрессии и с лучшим
прогнозом.
При исследовании частоты встречаемости полиморфизмов гена ТР53 и частоты развития рецидива рака желудка в течение первых 3 -х лет после операции на фоне проведенной химиотерапии на основе 5- ФУ были изучены образцы опухолевой ткани у 58 больных, которым было проведено комбинированное лечение. Определяли возможность использования полиморфизмов гена ТР53 в качестве дополнительного фактора, определяющего эффективность проводимого лечения у больных местно - распространенным раком желудка, а также фактора индивидуальной чувствительности к химиотерапии. Исследование проводилось также в двух группах: в одной - 30 больных, у которых за время наблюдения выявлен
рецидив заболевания (местный рецидив, канцероматоз брюшины, отдаленные метастазы), в другой - 28 пациентов, у которых в процессе наблюдения не выявлено прогрессирования заболевания. Медиана наблюдение составила 33 месяца (от 3 до 40 месяцев).
В результате проведенного анализа выявлено, что полиморфизм Arg/Pro достоверно чаще встречается у больных с отсутствием рецидива заболевания в течение первых 3 -х лет после операции на фоне адьювантной химиотерапии на основе 5-ФУ (р=0,054). В то время как полиморфизм Pro/Pro достоверно чаще определяется у больных с возникшим рецидивом опухоли (р=0,031) (таблица 22).
На рисунке 25 представлены частоты встречаемости полиморфизмов гена ТР53 у пациентов в зависимости от частоты возникновения рецидива заболевания в течение первых 3 -х лет после радикальной операции на фоне проводимого комбинированного лечения с использованием схем химиотерапии на основе 5- ФУ у больных местно-распространенным раком желудка.
100%
90%
80%
70%
60%
50%
40%
30%
20%
10%
0%
Arg/Arg Arg/Pro Pro/Pro
Рисунок 25. Сравнение частоты встречаемости полиморфизмов гена ТР53 в зависимости от частоты возникновения рецидива рака желудка.
Достоверных различий в группах больных с инсерцией 16 нуклеотидов в 3 интроне и частотой рецидивирования местно-распространенного рака желудка найдено не было (таблица 22).
Активация гена ТР53 происходит при повреждении ДНК клетки, в случае невозможности репарации ДНК, продукт гена инициирует процедуру апоптоза, что приводит к гибели клетки. Эта функция белка очень важна при химиотерапии, когда поврежденные препаратом опухолевые клетки подвергаются апоптозу. На активность белка влияют полиморфные варианты в ДНК гена, которые располагаются в его регуляторных и кодирующих областях. В работе мы исследовали два полиморфизма - замену гуанина (G) на цитозин (C), приводящую к замене аминокислоты аргинин (Arg) на пролин (Pro) в 4 экзоне 72 кодоне, а также инсерцию 16 нуклеотидов в 3 интроне (рисунок 26).
Рисунок 26. Полиморфизмы гена ТР53, ассоциированные с изменением экспрессии.
Формы белка с Arg и Pro обладают различной электрофоретической активностью, а также различными биохимическими и биологическими свойствами. Форма белка с Pro менее эффективная в индукции апоптоза и не обеспечивает адекватной гибели опухолевых клеток в отсутствие аргининовой формы Arg [73,129].
Полиморфизм гена TP53 в 3-м интроне обусловлен инсерцией 16 пар нуклеотидов (ins 16 bp), может влиять на эффективность эспрессии гена и, как следствие, приводить к снижению апоптотического индекса и эффективности репарации ДНК. Установлено, что полиморфизм в интроне 3 приводит к снижению эффективности экспрессии TP53 и может быть причастен к нарушению процессов активации транскрипции генов-мишеней, необходимых для остановки клеточного цикла и запуска апоптоза [105,160].
В предыдущих исследованиях было показано, что больные с полиморфизмом Pro/Pro имеют худший прогноз, по сравнению с другими генотипами [147]. В то же время у носителей обоих аллелей уровень апоптоза может быть достаточно высок в связи с тем, что изоформа Pro высокоактивна в отношении ареста клеточного цикла при повреждении ДНК, тем самым обеспечивая высокий уровень апоптоза аллелем Arg [135]. В работе российских авторов, в которой сравнивалась эффективность неоадьювантной химиотерапии при раке молочной железы и немелкоклеточном раке легкого, получен статистически значимый ответ опухоли на проводимое лечение у больных с генотипом Arg/Pro [13]. Противоречивость литературных сведений может быть обусловлена и тем, что чувствительность к цитостатическому воздействию может снижаться при наличии соматических мутаций в гене ТР53 в опухолевых клетках, которые препятствуют их апоптотической гибели [208].
Наши результаты согласуются с опубликованными ранее. Генотип Pro/Pro связан с худшей эффективностью адьювантной химиотерапии на основе производных фторпиримидинов, поэтому его можно рассматривать как фактор худшего прогноза больных местно-распространенным раком желудка, подвергшихся комбинированному лечению. В свою очередь полиморфизм Arg/Pro связан с лучшей эффективность химиотерапии на основе 5 -ФУ, и его можно рассматривать как фактор благоприятного прогноза у данной категории больных.
В свою очередь генотипирование по полиморфизмам данных генов можно использовать в качестве дополнительного фактора при выделении группы пациентов с местно-распространенным раком желудка, имеющим более агрессивно протекающую клиническую форму, негативный прогноз и высокую вероятность развития рецидива на фоне комбинированного лечения.
4.2.
Еще по теме Анализ взаимосвязи полиморфных вариантов генов TYMS и ТР53 с клинико-морфологическими характеристиками опухоли и с рецидивированием рака желудка:
- ОГЛАВЛЕНИЕ
- Анализ взаимосвязи полиморфных вариантов генов TYMS и ТР53 с клинико-морфологическими характеристиками опухоли и с рецидивированием рака желудка