2.3.1 Определение концентрации цисплатина методом масс- спектрометрии с индуктивно связанной плазмой

Во время выполнения ВХГП проводился забор образцов перфузата (2 мл) и периферической крови (0,5 мл) у крыс на 10, 20, 30, и 40 минутах от начала перфузии. Пробы перфузата хранились в холодильнике при температуре 0-4^оС до момента отправки на анализ (не более суток).

Перед внесением образца в масс-спектрометр проводили пробоподготовку с использованием микроволновой печи (MARS 5). Автоклав с пробой во вкладыше помещали в микроволновую печь и разлагали в режиме, рекомендованном производителем: подъем температуры до 200 °С в течение 5 мин., выдерживание в течение 5 мин. при 200 °С, охлаждение до 45 °С. Для приготовления проб в автоклав с 5 мл концентрированной азотной кислоты помещалась 100 мкл биообразца (плазма, перфузат). Растворенную пробу разбавляли в 1000 раз 2% азотной кислотой.

В каждую пробу в качестве внутреннего стандарта добавляли раствор индия с целью компенсации погрешности разбавления. Раствор холостой пробы готовили с выполнением всех указанных выше операций.

Количественное измерение содержания цисплатина в пробах выполняли на масс-спектрометре с индуктивно-связанной плазмой ICP-MS X Series II (Рис. 10).

Рис. 10. Прибор ICP-MS X Series II фирмы Thermo Elemental (США)

Расчет концентрации цисплатина в биологических пробах проводился по калибровочным графикам, для построения которых были использованы стандартные растворы цисплатина концентраций 10, 100 и 1000 ppb.