Материалы и методы экспериментальных исследований

Экспериментальные исследования были выполнены на 20 кроликах- самцах породы шиншилла массой тела 2,0-2,5 кг в возрасте 4-5 мес. Исследования проведены в соответствии с Резолюцией ARVO «По использованию животных в экспериментальных исследованиях», правилами Good Clinical Practice (GCP) [144, 272].

Хронический ТИН воспроизведен путем однократного введения в ушную вену нормальной лошадиной сыворотки крови (производство БиолоТ, Россия), подогретую до 37⁰С, в количестве 12-15 мл на 1 кг массы тела. В целях десенсибилизации для предупреждения аллергического шока за 24 часа до введения сыворотки проводили преиммунизацию (вводили 1 мл/кг той же сыворотки) [171, 172] (рис. 2, рис. 3).

Клинические исследования глаз кроликов включали: биомикроскопию, офтальмоскопию и оптическую когерентную томографию (ОСТ) на сканере «3 D OCT-1000 MARK II» фирмы «Topcon» (Япония) (рис. 4). Оценивалась архитектоника слоев сетчатки, толщина слоя нервных волокон, пигментного эпителия и хороидеи.

Фоторегистрация глазного дна животных производилась с помощью педиатрической ретинальной камеры RetCam II («Clarity Medical Systems», США) (рис. 5).

Рис. 2. Нормальная лошадиная сыворотка крови («БиолоТ», Россия).

Рис. 3. Методика введения нормальной лошадиной сыворотки в ушную вену кролика.

Рис. 4. Трехмерный оптический когерентный томограф «3D OCT-1000 MARK II» фирмы Topcon (Япония).

Рис. 5. Педиатрическая ретинальная камера RetCam II (Clarity Medical Systems, США).

Через 1 мес кролики с моделированным хроническим ТИН подвергались воздействию ИНЭМП, генерируемым аппаратом ИНФИТА, на область головы животных, в течение 10 дней, дистанционно, через излучатель, расположенный на расстоянии 20-30 см от глаз, и напряженностью поля в зоне воздействия 1-2 мВ/см². Частота следования импульсов ежедневно менялась как 40 - 60 - 80 - 60 - 40 - 60 - 80 - 60 - 40 - 60 Гц (Рис. 6). Параметры ИНЭМП, генерируемого аппаратом ИНФИТА, были идентичны параметрам физического фактора, генерируемого аппаратом ИНФИТА-М.

Рис. 6. Методика воздействия ИНЭМП на экспериментальных животных.

Для изучения иммунного статуса и оценки влияния ИНЭМП на системный иммуновоспалительный процесс у животных опытной и контрольной группы проведены иммунологические исследования на базе ФНКЦ Детской гематологии, онкологии и иммунологии им. Дмитрия Рогачева совместно с д.м.н., профессором С.А. Румянцевым.

Были сформированы две группы животных: здоровые кролики, которых не подвергали воздействию импульсного низкочастотного

электромагнитного поля (n=10), кролики с хронической воспалительной патологией (n=10), обследованные до воздействия ИНЭМП и после окончания 10-ти дневного курса воздействия ИНЭМП. Объектом исследования служила кровь из ушной вены кроликов [176].

Подсчет клеток крови производили с использованием автоматического анализатора клеток крови Pentra 60 C+ Horiba АВХ (Франция). На проточном цитометре FACSCalibur «Becton Dickinson», (США) в реакции прямой иммунофлюоресценции выявляли лимфоциты, несущие мембранные маркеры той или иной субпопуляции иммунокомпетентных клеток. С помощью иммуноферментного анализа проводили количественное определение в сыворотке крови цитокинов.

Морфологические исследования тканей почки животных опытной группы выполняли на кафедре гистологии лечебного факультета и кафедре морфологии медико-биологического факультета ГБОУ ВПО РНИМУ им. Н.И.Пирогова Минздрава России совместно с доцентом, к.б.н. А.А. Древалем и доцентом, к.б.н. Г.В. Ставицкой.

Исследования почек животных проводили через 45 дней после моделирования хронического ТИН. Животных выводили из эксперимента путем передозировки наркоза. Применяли двухкомпонентный наркоз: для премедикации вводили 2% раствор ксилозина гидрохлорида (рометар). Через 10-16 мин. внутривенно в краевую ушную вену вводили золетил-50 в дозе более 6,6 мг/кг массы тела [15].

Материалом для морфологических исследований явились почки животных, полученные после их препарирования. Кусочки ткани фиксировали в 2,5% растворе глутаральдегида на 0,2 М какодилатном буфере, затем осуществляли промывание в дистиллированной воде. Далее проводили обезвоживание в растворах восходящей концентрации ацетона и высушивали. Полутонкие срезы окрашивали гематоксилином и эозином.

Исследование гистологических препаратов проводили методом световой микроскопии, а фоторегистрация осуществлялась на цифровую камеру в комплекте аппаратно-програмного комплекса автоматической морфоденситометрии «Диаморфобъектив» («ДиаМорф», Россия).

2.4.