Относительное содержание флуорофоров в хлороформном экстракте из РПЭ кадаверных глаз человека без признаков патологии в зависимости от возраста доноров
В данной серии экспериментов было получено и исследовано 42 индивидуальных образца суспензии клеток РПЭ, выделенных из кадаверных глаз без признаков патологии от доноров в возрастном диапазоне от 17 до 78 лет.
Для каждого образца был зарегистрирован спектр флуоресценции при возбуждении длиной волны 430 нм. Независимо от возраста доноров максимумы спектров флуоресценции суспензии клеток РПЭ находились в области 575±15 нм (данные не представлены). Из каждого образца суспензии клеток РПЭ был получен хлороформный экстракт. ВЭЖХ-анализ был проведен с детектированием по поглощению на длине волны 430 нм. На рис. 10А представлена типичная хроматограмма, полученная при ВЭЖХ-анализе хлороформного экстракта РПЭ индивидуального кадаверного глаза без визуально наблюдаемой патологии. Пики и/или группы пиков 1-5 - это продукты фотоокисления и фотодеградации А2Е, пики 6 и 8 - А2Е и изо-А2Е, соответственно, группа пиков 11 может соответствовать продуктам модификации А2Е, идентифицированным в работах (Kim et al., 2007; Wu et al., 2009; Sparrow et al., 2012; Yamamoto et al., 2012).Для статистической обработки полученных результатов данные по близким возрастам объединяли в шесть групп (1, 2, 3, 4, 6 и 8). Из данных ВЭЖХ-анализа в исследуемых хлороформных экстрактах РПЭ было определено относительное содержание отдельных флуорофоров и/или групп флуорофоров. На рис. 10Б (серые столбцы) и в табл. 5 представлены результаты этого анализа. Из диаграммы хорошо видно, что с увеличением возраста донора увеличивается относительное содержание как самого А2Е (пик 6), так и продуктов его фотоокисления и фотодеградации (пики/группы пиков 1-5). Непонятным является феномен, обнаруженный нами в различных экспериментах, а именно: резкое падение относительного содержания изо-формы А2Е в хлороформном экстракте (пик 8) с увеличением возраста донора. Не исключено, что в ЛГ эта изомерная форма А2Е легче подвергается окислению и деградации.
Следует отметить, что возрастное увеличение относительного содержания большинства продуктов, как самого А2Е, так и продуктов его фотоокисления и фотодеградации, носит практически линейный характер (см. рис. 10Б). Однако соотношение A2Eox deg/A2E + iso-A2E при этом увеличивается с 0,69±0,03 до 1,32±0,04 (см. рис. 10В, табл. 6). Другими словами, относительное содержание продуктов фотоокисления и фотодеградации А2Е с возрастом увеличивается. Не исключено, что этот феномен соотносится с патогенезом ВМД.Таким образом, можно предположить, что зависимое от возраста повышение интенсивности аутофлуоресценции глазного дна без признаков патологии обусловлено не только, а может быть и не столько ростом относительного содержания А2Е, сколько увеличением относительного содержания продуктов его фотоокисления и фотодеградации.
Рис. 10. Относительное содержание флуорофоров ЛГ в хлороформном экстракте из РПЭ индивидуального кадаверного глаза человека без визуализированной патологии и в двух случаях с признаками ВМД
