ОГЛАВЛЕНИЕ

Список использованных сокращений..................................................................

ВВЕДЕНИЕ.....................................................................................................

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.........................................................................

1. Изменения в сосудистой стенке на ранних стадиях

экспериментального атеросклероза...............................................................

2. Морфологическая гетерогенность эндотелия человека...........

3. Молекулярные механизмы распознавания, адгезии и

миграции клеток крови...................................................................................

3.1. Молекулы клеточной адгезии ЭК..............................................

3.1.1. Семейство селектинов...............................................................

Е-селектин.......................................................................................................

Р-селектин.......................................................................................................

L-селектин.......................................................................................................

3.1.2. Семейство иммуноглобулинов..................................................

ICAM-1 /ІСАМ-2.............................................................................................

VCAM-1...........................................................................................................

РЕСАМ-1.........................................................................................................

3.2. Другие участники взаимодействия ЭК-лейкоцит.....................

Фактор активации тромбоцитов, PAF............................................................

Интерлейкин-8................................................................................................

Трансформирующий ростовой фактор-бета, TGF-P.....................................

3.3. Дальнейшая судьба лейкоцитов в интиме................................

4. Цитокиновая сеть. Источники и мишени цитокинов в

сосудистой стенке..........................................................................................

4.1. Фактор некроза опухолсй-альфа, TNF-a...................................

4.2. Интерлейкин-1............................................................................

4.3. Антагонист рецептора ИЛ-1......................................................

4.4. Интерлейкин-4............................................................................

4.5. Интсрлейкин-6............................................................................

4.6. Интерлейкин-10..........................................................................

4.7. Интерлейкин-11..........................................................................

4.8. Интерлейкин-13..........................................................................

4.9. Колоние-стимулирующие факторы..........................................

з

4.10. Трансформирующий ростовой фактор-бета, TGF-p................. 47

4.11. Интерфероны.............................................................................. 50

5. Роль вирусов в инициации атеросклероза................................................ 52

5.1. Особенности развития вирусной инфекции сосудистой стенки 54

5.2. Адсорбция вирусных частиц и инфицирование........................ 55

5.3. Особенности метаболизма инфицированных клеток............... 55

6. Структурно-функциональные особенности различных типов культивируемых клеток в условиях невесомости и

моделируемой гипогравитации.................................................................... 57

Заключение................................................................................................... 59

ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ..................

1. Изучение организации эндотелия аорты человека in situ............................ 61

1.1. Химические реактивы................................................................... 61

1.2. Аутопсийный материал................................................................. 61

1.3. Импрегнация межклеточных контактов....................................... 61

1.4. Выбор зоны исследования............................................................ 63

1.5. Морфометрия и построение гистограмм..................................... 63

2. Культура клеток .......................................................................................... 64

2.1. Культуральные среды, реагенты и пластик................................. 64

2.2. Первичная культура эндотелия аорты человека.......................... 64

2.3. Эндотелий пупочной вены человека............................................ 66

2.4. Гладкомышечные клетки.............................................................. 67

2.5. Лейкоциты и линейные клетки...................................................... 67

2.6. Совместное культивирование ЭК и ГМК..................................... 68

2.7. Импрегнация границ ЭК в культуре............................................. 68

3. Анализ пролиферативной активности клеток............................................. 69

3.1. Кривые роста................................................................................. 69

3.2. Оценка синтеза ДНК по включению меченого

предшественника.......................................................................................... 69

3.3. Авторадиография.......................................................................... 70

4. Оценка повреждающего действия химических и физических

факторов........................................................................................................ 70

5. Вирусная инфекция ЭК в культуре..............................................................

6. Модель гипогравитации............................................................................... 72

7. Иммуногистохимия и поточная цитофлуориметрия.................................. 72

8. Статистический анализ.............................................................. 74

ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ ........................................... 75

1. Особенности организации эндотелия аорты человека в норме

и при атеросклерозе................................................................................... 75

1.1. Возрастная динамика изменений эндотелия визуально

неизмененных сосудов............................................................................... 75

1.2. Пространственная организация эндотелия в зонах НПА и

ВПА. Кластеризация эндотелия................................................................. 78

1.3. Частота выявления кластеризованного эндотелия в зонах НПА

и ВПА.......................................................................................................... 80

1.4. Эндотелий атеросклеротической аорты................................... 81

2. Культура ЭК аорты человека.................................................... 86

2.1. Содержание многоядерных ЭК в культурах эндотелия из зон

НПА и ВПА................................................................................................. 86

2.2. Пролиферативная активность ЭК аорты человека в культуре 89

2.3. Особенности пролиферации клеток из зон НПА и ВПА

(исследование с помощью кривых роста)................................................. 90

2.4. Особенности пролиферации клеток из зон НПА и ВПА

(исследование с помощью радиоавтографии).......................................... 91

2.5. Способность ЭК из зон НПА и ВПА к длительному

субкультивированию.................................................................................. 93

2.6. Формирование колоний при низкой плотности посадки.

Камбиальные клетки эндотелия................................................................. 94

3. Повреждение и репарация эндотелия........................................ 97

3.1. Гипертермия, как потенциальный фактор, вызывающий

повреждение эндотелия.............................................................................. 97

3.1.1. Изменения ЭК при коротких временах воздействия

гипертермии................................................................................................ 97

3.1.2. Повреждение ЭК при длительном воздействии гипертермии 100

3.1.3. Защитное действие цАМФ-повышающих препаратов при

тепловом повреждении ЭК........................................................................ 101

3.2. Повреждение эндотелия окисленными производными

холестерина................................................................................................ 102

3.2.1. Устойчивость ЭК в культурах из зон НПА и ВПА к

повреждающему действию триола

3.3.Способность ЭК из зон НПА и ВПА отвечать подъемом

цАМФ на добавление цАМФ-повышаюших препаратов................ 106

4. Поиск функциональных различий эндотелия в зонах с

различной предрасположенностью и степенью атеросклеротического поражения 107

4.1.Взаимодействие ЭК - ГМК в условиях совместного

культивирования.................................................................................. 108

4.2.Функциональная гетерогенность популяций эндотелия........... 109

5. Экспрессия МКА и взаимодействие ЭК-лейкоцит в культуре 112

6. Модель кластеризованного эндотелия. Функциональная

гетерогенность кластеров ЭК in vitro................................................. 117

6.1.Экспериментальная модель........................................................... 117

6.2.Структурно-функциональные особенности кластеров ЭК....... 119

6.2.1. Содержание телец Вейбеля-Паладе и фактора фон

Виллебранда.........................................................................................

6.2.2. Активность в отношении интимальных ГМК............................... 120

6.2.3. Гетерогенность экспрессии МКА.................................................. 121

6.2.4. Синтез и депонирование внеклеточного матрикса...................... 124

7. Вирусная инфекция эндотелия...................................................... 130

7.1.Структурно-функциональные признаки вирусной инфекции

культивируемых ЭК человека.......................................................... 130

7.2.Экспрессия молекул клеточной адгезии ВПГ-1-

инфицированными ЭК....................................................................... 132

7.3.Адгезия клеток периферической крови на инфицированный

эндотелий............................................................................................. 133

7.4.Влияние ГМК на развитие вирусной инфекции эндотелия....... 134

7.5.Продукция цитокинов ВПГ-1-инфицированными ЭК.................. 137

7.6.Продукция цитокинов лейкоцитами крови, активированными

в процессе контакта с ВПГ-1-инфицированным эндотелием 138

7.7.Влияние кондиционированных сред, полученных от

лейкоцитов, активированных в результате контакта с инфицированным/фиксированным эндотелием на репродукцию вируса в ЭК............................................................. 139

7.8.Влияние кондиционированных сред от активированных

лейкоцитов на экспрессию МКА интактным эндотелием............... 140

7.9. Особенности развития вирусной инфекции в модели

кластеризованного эндотелия............................................................ 142

8. Структурно-функциональные особенности эндотелия

человека в условиях моделируемой гипогравитации....................... 145

8.1. Особенности пролиферации и формирования монослоя ЭК в

условиях моделируемой гипогравитации.......................................... 146

8.2. Влияние моделируемой гипогравитации на цитоскелет и

миграционную способность клеток...................................................... 148

8.3. Экспрессия молекул клеточной адгезии и взаимодействие ЭК-

лейкоцит в условиях гипогравитации................................................... 151

ЗАКЛЮЧЕНИЕ...................................................................................... 155

ВЫВОДЫ................................................................................................ 160

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ....................................................................... 162