<<
>>

Вирусная инфекция ЭК в культуре

Эндотелиальные клетки аорты и пупочной вены человека выделяли и культивировали до состояния монослоя, как описано выше. Конфлузнтные культуры отмывали раствором Эрла, снимали трипсином-ЭДТА и рассаживали в 24- или 48- ячеечные культуральные планшеты с разведением 1:2.

В экспериментах по изучению особенностей репродукции вируса в отдельных клеточных популяциях использовали приемы получения дискретных колоний ЭК, описанные в соответствующих разделах. В дальнейшем, с этими культурами работали так же, как с остальными.

На 3-4 сутки после посадки клетки инфицировали вирусом простого герпеса 1 типа (ВПГ-1, линия R39) при множественности инфекции (МИ) от 0.1 до 0.0001. Через 1 час инкубации при +37°С культуры отмывали раствором Эрла и/или средой культивирования и заменяли среду на свежую. Морфологические изменения клеток контролировали с помощью фазово-контрастной микроскопии. Титрование вируса в образцах культуральной среды проводили стандартным методом предельных разведений на чувствительной культуре клеток линии Vero.

Определение ИФН-альфа проводили на культуре диплоидных фибробластов человека стандартным методом предельного разведения [Scheglovitova et al., 2000]. Концентрации в культуральной среде ИЛ-1, ИЛ-6, ИЛ-8 и TNF-a измеряли иммуноферментным методом с использованием наборов "Цитокин", (Протеиновый контур, Санкт-Петербург) и "Cytelisa" (США) в случае ИФН-гамма.

Для активации клеток крови, полученных методом градиентного центрифугирования (см. выше) использовали прием, предложенный Capobianchi et al. [1985]. Культуры контрольных и инфицированных ВПГ-1 ЭК, отмывали раствором Эрла и фиксировали 0.1 % раствором глутарового альдегида на ФБД в течение 30 минут. После серии отмывок ФБД и средой культивирования, к фиксированным ЭК добавляли суспензию лейкоцитов периферической крови и инкубировали в течение 24-48 часов. Супернатанты центрифугировали и использовали для анализа спектра секретируемых цитокинов или для добавления к культивируемым (инфицированным или контрольным) ЭК.

6.

<< | >>
Источник: РОМАНОВ Юрий Аскольдович. СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ЭНДОТЕЛИЯ ЧЕЛОВЕКА В НОРМЕ И ПРИ АТЕРОСКЛЕРОЗЕ. Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук. Москва - 2003 г. 2003

Скачать оригинал источника

Еще по теме Вирусная инфекция ЭК в культуре:

  1. Глава 19. ВИЧ-инфекция
  2. 1.5 Тесты для лабораторной диагностики при ВИЧ-инфекции
  3. Природная очаговость клещевых инфекций
  4. Риновирусная инфекция
  5. Респираторно-синцитиальная инфекция (РС-инфекция)
  6. Аденовирусная инфекция
  7. Менингококковая инфекция
  8. ВИРУСНЫЙ ГЕПАТИТ A
  9. ВИРУСНЫЙ ГЕПАТИТ E
  10. Цитомегаловирусная инфекция
  11. ГЛАВА 1 ПРОБЛЕМА ТУБЕРКУЛЕЗА У БОЛЬНЫХ ВИЧ-ИНФЕКЦИЕЙ И НАРКОМАНИЕЙ, ПУТИ ЕГО ПРОФИЛАКТИКИ (обзор литературы)
  12. Тканевые изменения при инфекциях
  13. Особенности развития вирусной инфекции сосудистой стенки.
  14. Вирусная инфекция ЭК в культуре
  15. Вирусная инфекция эндотелия
  16. 1.1 РЕАКТИВНЫЕ АРТРИТЫ, АССОЦИИРОВАННЫЕ С ХЛАМИДИЙНОЙ ИНФЕКЦИЕЙ
  17. Иммунологические аспекты ВИЧ-инфекции, сочетанной с туберкулезом
  18. Эпидемиология туберкулеза, ВИЧ-инфекции и вирусных гепатитов в Хошимине и Санкт- Петербурге.
- Акушерство и гинекология - Анатомия - Андрология - Биология - Болезни уха, горла и носа - Валеология - Ветеринария - Внутренние болезни - Военно-полевая медицина - Восстановительная медицина - Гастроэнтерология и гепатология - Гематология - Геронтология, гериатрия - Гигиена и санэпидконтроль - Дерматология - Диетология - Здравоохранение - Иммунология и аллергология - Интенсивная терапия, анестезиология и реанимация - Инфекционные заболевания - Информационные технологии в медицине - История медицины - Кардиология - Клинические методы диагностики - Кожные и венерические болезни - Комплементарная медицина - Лучевая диагностика, лучевая терапия - Маммология - Медицина катастроф - Медицинская паразитология - Медицинская этика - Медицинские приборы - Медицинское право - Наследственные болезни - Неврология и нейрохирургия - Нефрология - Онкология - Организация системы здравоохранения - Оториноларингология - Офтальмология - Патофизиология - Педиатрия - Приборы медицинского назначения - Психиатрия - Психология - Пульмонология - Стоматология - Судебная медицина - Токсикология - Травматология - Фармакология и фармацевтика - Физиология - Фтизиатрия - Хирургия - Эмбриология и гистология - Эпидемиология -