<<
>>

Определение популяционного и субпопуляцнонного состава лимфоцитов периферической крови.

Популяционный и субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови обследованных детей определяли в

иммунофлуоресцентном тесте с использованием моноклональных антител (МАТ) производства ООО «Сорбент», Москва, ГНЦ Институт иммунологии ФМБА России.

В работе использовали следующие МАТ. К маркеру общей популяции Т-лимфоцитов - CD3, к маркеру Т-хелперов - CD4, к маркеру Т- цитотоксических лимфоцитов - CD8, к маркеру В-лимфоцитов - CD20.

Лимфоциты из гепаринизированной крови выделяли центрифугированием на градиенте фиколл-верографина. К 1-0,1 млн. лимфоцитов в объеме 50 мкл. в лунки круглодонных микропланшет вносили 5 мкл МАТ к соответствующему клеточному маркеру и инкубировали 30-45 мин. при +4°С. После отмывания, к осадку клеток добавляли 50 мкл. F(ab)2- фрагментов овечьих антител к иммуноглобулинам мыши, меченных ФИТЦ и разведенных 1: 100. Клетки суспендировали и инкубировали 30 мин. при +4°С. После отмывания окрашенные клетки на предметном стекле просматривали в люминесцентном микроскопе «МЛ-2» под иммерсией (объектив х90) в затемненном помещении.

Количество АГ-позитивных клеток определяли как процент флуоресцирующих клеток при просматривании 200 лимфоцитов за вычетом процента флуоресцирующих клеток, наблюдаемых в препарате отрицательного контроля. В качестве отрицательного контроля использовали препараты, подготовленные аналоі-ичньїм образом, за исключением этапа обработки клеток соответствующими МАТ. Вместо МАТ использовали в этом случае солевой раствор Хенкса.

23.

<< | >>
Источник: Асмалова Аминат Магомедовна. Состояние системного и местного иммунитета у часто болеющих детей с патологией ЛОР-органов. Диссертация на соискание учевой степени кандидата медицинских наук. Оренбург - 2007. 2007

Скачать оригинал источника

Еще по теме Определение популяционного и субпопуляцнонного состава лимфоцитов периферической крови.:

  1. Определение популяционного и субпопуляцнонного состава лимфоцитов периферической крови.
- Акушерство и гинекология - Анатомия - Андрология - Биология - Болезни уха, горла и носа - Валеология - Ветеринария - Внутренние болезни - Военно-полевая медицина - Восстановительная медицина - Гастроэнтерология и гепатология - Гематология - Геронтология, гериатрия - Гигиена и санэпидконтроль - Дерматология - Диетология - Здравоохранение - Иммунология и аллергология - Интенсивная терапия, анестезиология и реанимация - Инфекционные заболевания - Информационные технологии в медицине - История медицины - Кардиология - Клинические методы диагностики - Кожные и венерические болезни - Комплементарная медицина - Лучевая диагностика, лучевая терапия - Маммология - Медицина катастроф - Медицинская паразитология - Медицинская этика - Медицинские приборы - Медицинское право - Наследственные болезни - Неврология и нейрохирургия - Нефрология - Онкология - Организация системы здравоохранения - Оториноларингология - Офтальмология - Патофизиология - Педиатрия - Приборы медицинского назначения - Психиатрия - Психология - Пульмонология - Стоматология - Судебная медицина - Токсикология - Травматология - Фармакология и фармацевтика - Физиология - Фтизиатрия - Хирургия - Эмбриология и гистология - Эпидемиология -