Иммуногистохимическое исследование

Принцип иммуногистохимического (ИГХ) исследования был предложен более 80 лет назад J.R. Marrack (1934) и заключается в том, что в качестве гистохимических реагентов используют антитела, к которым присоединяют определенный флуоресцентный маркер (Рисунок 1.1).

Одним из важных открытий для дальнейшего широкого использования иммуногистохимического исследования было выявление в 1951 году J.M. Marshall возможности локализовать in vitro молекулы адренокортикотропного гормона в гипофизе с помощью антител, меченных флуоресцентными маркерами [117].

Методы использования конъюгированных ферментами антител были независимо разработаны P.K. Nakane, G.B. Pierce (1966) и S. Avrameas, J. Uriel (1966) [1]. Наибольшую популярность получил пероксидазно-антипероксидазный метод L.A. Sternberger с соавторами (1979) [188]. Для визуализации энзиматических маркеров в конце реакции антиген-антитело проводят гистохимическую реакцию, в результате которой фермент становится видимым на световом уровне. Дальнейшее усовершенствование этой реакции привело к тому, что продукты реакции были видны и на электронно-микроскопическом уровне. При взаимодействии с осмием они становились электронно-плотными [1].

Рисунок 1.1 Схема проведения непрямой иммуногистохимической реакции и реакции иммунофлюоресценции.

В последние годы применение иммуногистохимических реакций в морфологии широко развивалось в связи с разработкой новых методов конъюгации антител, фиксацией тканей, демаскирования антигенов, а также использования новых ламп и фильтров для флуоресцентной микроскопии [1, 16, 19, 22].

В настоящее время нет единого мнения относительно того, из каких Т- лимфоцитов идет развитие неопластических клеток при ГМ [36, 59]. Высказываются предположения, что фенотип лимфоцитов может изменяться в зависимости от факторов окружающей среды [164, 165, 218,].

Тем не менее, установлено, что в большинстве случаев классический иммунофенотип малигнизированных клеток при ГМ соответствует зрелым Т- клеткам памяти: βF1+ CD3+ CD4+ CD5+ CD7+ CD8- CD45RO+. В поздних стадиях ГМ может наблюдаться потеря экспрессии пан-Т-клеточных антигенов CD3, CD5 и CD7 [63].

Исследователи придают значение не только иммунофенотипу опухолевых клеток, но и их микроокружению. Считается, что клетки, окружающие опухоль, могут оказывать влияние на развитие канцерогенного процесса [54, 61].

Соотношение CD4/CD8-лимфоцитов

Одним из важных показателей для диагностики ГМ является определение соотношения лимфоцитов с маркерами CD4/CD8 в коже. Установлено, что у пациентов с воспалительными заболеваниями этот показатель будет гораздо ниже, чем у больных ранними стадиями ГМ [159, 193].