<<
>>

Исследование стабильности фуллерена Сбо в биологических субстратах с использованием модельных систем in vitro

Исследование проводили на 12 крысах массой около 300 г. За 12 часов до забоя у животных забирали всю пищу, доступ к воде не ограничивали. Весь инструмент и используемую посуду стерилизовали в течение 12-часов в 96%

растворе этилового спирта.

Животных обескровливали из нижней полой вены под эфирной анестезией; в асептических условиях отбирали кровь в пробирки, содержащие Трилон Б из расчета 1,6 мг/мл крови [15]в физиологическом растворе и печень, которую немедленно взвешивали на весах с точностью ±0,1 г и охлаждали до 0 оС.

Все использованные растворы реактивов были стерилизованы пропусканием через фильтр с диаметром пор 0,2 мкм. Печень перфузировали на холоду стерильным 0,154 M KCl на 0,05 M Трис-HCl буфере рН 7,4 и готовили гомогенат ткани в этом буфере в отношении 1:4 по массе в гомогенизаторе Поттера с тефлоновым пестиком. Гомогенаты объединяли в пул, который делили на 2 части. 1-ую часть гомогената использовали в опыте непосредственно, а из второй выделяли микросомальную фракцию. В гомогенаты перед проведением инкубации с фуллереном добавляли 1 таблетку ингибитора протеаз Complete Protease Inhibitor Cocktail (производства фирмы Roche, Германия) на каждые 50 мл гомогената и хлороформ 1 мкл/мл гомогената для предотвращения бактериальной контаминации.

Количества фуллерена C60, вносимые в биологические образцы, выбирали с учетом использованных в подострых экспериментах доз 10, 1 и 0,1 мг/кг массы тела крысы. Например, для крысы массой 300 г средний объем циркулирующей крови составляет ~18 мл [109], а средняя масса печени ~11 г (данные получены из результатов предыдущих исследований в рамках данной диссертации), однократно вводимые дозы фуллерена 3,0 мг; 0,3 мг и 0,03 мг на крысу. В соответствии с этим, к 6 мл крови было добавлено 1,0 мг; 0,1 мг и 0,01 мг фуллерена C60; к 2 мл гомогената печени (из расчета содержания 0,4 г печени) было добавлено 0,108 мг; 0,011 мг и 0,0011 мг фуллерена C60; к 2,2 мл микросомальной фракции печени (из расчета содержания 1,1 г печени) добавляли 0,3 мг; 0,03 мг и 0,003 мг фуллерена C60.

Использовали немодифицированный фуллерен C60, из которого готовили раствор в толуоле с концентрацией 1 мг/мл.

Рассчитанные в соответствии с вышеуказанными дозами объемы этого раствора вносили в пустые пробирки и

оставляли на ночь под тягой при комнатной температуре для испарения толуола. Введение фуллерена Сб0 в биологические образцы проводили, внося в эти пробирки по 2 мл гомогената или 2,2 мл микросомальной фракции печени. Содержимое пробирок перемешивали на вортексе при 3000 об/мин в течение 5 минут и обрабатывали в течение 30 минут в ультразвуковой ванне «Сапфир» мощностью 200 Вт, с рабочей частотой 35 кГц и удельной звуковой мощностью 20 Вт*дм-3. Для внесения фуллерена в образец крови ее предварительно центрифугировали при 3000 об/мин в центрифуге с охлаждением. Отбирали плазму и вносили в пробирки с рассчитанными концентрациями фуллерена Сб0, после чего обрабатывали аналогично пробам микросом и гомогената. Затем отмеренные количества плазмы с диспергированным фуллереном Сб0 добавляли в пробирки с цельной кровью, аккуратно перемешивали и вносили по 1 мл в пробирки для инкубации.

Содержимое контрольных (без инкубации) пробирок подвергали экстракции немедленно сразу после добавления фуллерена Сб0 к биологическим образцам. Остальные пробирки инкубировали в темноте при температуре +37 оС в воздушном термостате в течение 3, 6, 12 и 24 часов; после каждого временного промежутка часть образцов подвергали экстракции, с последующим количественным анализом фуллерена Сб0 методом ВЭЖХ. Все образцы выполняли в 2-х повторах.

3.5

<< | >>
Источник: ШИПЕЛИН ВЛАДИМИР АЛЕКСАНДРОВИЧ. ИЗУЧЕНИЕ ТКАНЕВОГО РАСПРЕДЕЛЕНИЯ ФУЛЛЕРЕНОВ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ И ИХ ТОКСИКОЛОГО-ГИГИЕНИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА. ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата медицинских наук. Москва - 2014. 2014

Еще по теме Исследование стабильности фуллерена Сбо в биологических субстратах с использованием модельных систем in vitro:

  1. ОГЛАВЛЕНИЕ
  2. Исследование стабильности фуллерена Сбо в биологических субстратах с использованием модельных систем in vitro
  3. Эксперимент по исследованию стабильности фуллерена Сбо в биологических субстратах с использованием модельных систем in vitro
  4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
- Акушерство и гинекология - Анатомия - Андрология - Биология - Болезни уха, горла и носа - Валеология - Ветеринария - Внутренние болезни - Военно-полевая медицина - Восстановительная медицина - Гастроэнтерология и гепатология - Гематология - Геронтология, гериатрия - Гигиена и санэпидконтроль - Дерматология - Диетология - Здравоохранение - Иммунология и аллергология - Интенсивная терапия, анестезиология и реанимация - Инфекционные заболевания - Информационные технологии в медицине - История медицины - Кардиология - Клинические методы диагностики - Кожные и венерические болезни - Комплементарная медицина - Лучевая диагностика, лучевая терапия - Маммология - Медицина катастроф - Медицинская паразитология - Медицинская этика - Медицинские приборы - Медицинское право - Наследственные болезни - Неврология и нейрохирургия - Нефрология - Онкология - Организация системы здравоохранения - Оториноларингология - Офтальмология - Патофизиология - Педиатрия - Приборы медицинского назначения - Психиатрия - Психология - Пульмонология - Стоматология - Судебная медицина - Токсикология - Травматология - Фармакология и фармацевтика - Физиология - Фтизиатрия - Хирургия - Эмбриология и гистология - Эпидемиология -